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主题：【原创】【极限体验】平衡嗷嗷麻烦，色谱峰咣咣性感（四）(12月份)

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glucosides
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发表于：2011/12/05 23:01:29 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
该帖子已被samanthalas设置为精华；
【发贴背景】
实验嗷嗷顺利，新化合物咣咣出（一）
http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20111203/3687561/
实验嗷嗷凄惨，化合物咣咣不纯（二）
http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20111204/3689304/
实验嗷嗷忐忑，化合物咣咣争气（三）
http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20111205/3691424/

【实验目的】——我尽量说得让看贴的人明白我的意思，尽量。
    对于做植物提取分离的人来说，随着实验的进行，化合物数量会越来越多。化合物数量一多，分到相同化合物的可能性也会越来越大； 同一化合物是不需要一直分离的，分到几十毫克的量就够了；同一化合物也不需要反复进行NMR测试一类（测试之前，你不知道是同一个化合物的，呵呵）。因此，避免重复，就成了一个关键问题。本贴的主要内容是：考察同一化合物在同一色谱柱、不同流动相条件下保留时间的不同，为以后其它化合物的比对提供一定的理论依据。
    比如，化合物A，色谱柱X，在30%甲醇/水条件下，保留时间为10min；化合物B，色谱柱X，在20%甲醇/水条件下，保留时间为15min，它们到底是不是同一个化合物（化合物A和化合物B的TLC行为及紫外吸收相同）？此贴能为此种情况提供一个参考。

【仪器试剂】
水：重蒸水
甲醇：色谱纯，天津大茂   
液相：Waters 高效液相，Waters 996 DAD检测器，Waters Model 600 controller[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p]液相色谱[/url]

【液相色谱条件】 
色谱柱：Ultimate XB-C18柱（5μm, 4.6x250mm）
流动相：20%、30%、40%甲醇/水
标准品：geniposide
流速：1.0ml/min
进样量：2微升
检测波长：全波长扫描

【实验结果】
平衡是非常非常麻烦的，我最烦平衡了；
色谱峰倒是蛮“性感”的，相当地苗条了；
首先是40%甲醇/水，保留时间6.194min


然后采用的是30%甲醇/水，保留时间12.18min，跟40%呈现2倍关系


最后采用20%甲醇/水，保留时间38.18min，跟30%呈现约3倍的关系


其它如50%出峰太早，10%出峰太晚，谱图就不上了，对我的比对工作没有任何参考价值。

【小结与讨论】
1. 特别声明：对于化合物比对工作而言，以上数据只做参考，不能作为准确数据；

2. 如果某化合物1，在30%甲醇/水条件下，保留时间为5min，那它在20%甲醇/水条件下，保留时间会在一定会是15min吗？这种计算方法是不可行的。

3. 那此贴的意义在哪？意义在于，如果某化合物2在20%甲醇/水条件下为15min左右的时候，我会考虑，它跟某化合物1，有可能是同一化合物，会将它们进行比对。如果某化合物2在20%甲醇/水条件下为20min，那我会考虑，它们不是同一化合物。

4. 此法不提倡（我相信也没人会细看这贴子，细看了也不会用，想用也没地方用），它为我的实验提供了很多帮助。但值得注意的是，我也曾在此法上栽过跟头。

5. 只是一种最为初级的化合物比对方法，对我而言，我以前用，现在用，将来还得用（没办法，化合物数量多了，真的很麻烦，经常分重）；对你而言，一带而过的好。

6. 我希望看贴的人没看懂，看懂也不感兴趣，感兴趣也不要问，因为，更多的是经验成分。
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glucosides
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2011/12/5 23:01:40 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
沙发占了，备用。
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glucosides
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2011/12/5 23:06:55 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
鉴于平衡非常地麻烦，而且各种资料上面一谈到平衡，都得什么半小时一个小时以上。我对这些非常反感，分析柱，我一般平衡10分钟，顶多15分钟，撑死20分钟。平衡30分钟？见鬼去吧，浪费生命

我要发一篇体验，说说不同的平衡时间下，色谱峰的差异
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yuduoling
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2011/12/6 8:24:50 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 glucosides(glucosides) 发表:
6. 我希望看贴的人没看懂，看懂也不感兴趣，感兴趣也不要问，因为，更多的是经验成分。


有一点点看懂，感一点点兴趣，差一点点要问。最后一看，这是经验之谈，知道这些经验可以参考，在实验中需要去理解和体会
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冷冷的冰雨
xy4585618
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2011/12/6 8:27:50 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
楼主很高产  ！赞赞赞

平衡的时间长短和流动相有关系，要是按照楼主说的是以甲醇-水为流动相，平衡时间应该不会长，以本人经验判断最多十几分钟就可以搞定
该帖子作者被版主 samanthalas加 10积分， 2经验，加分理由：１１月份居民津贴！
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2011/12/6 8:31:16 Last edit by xy4585618
dahua1981
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2011/12/6 8:28:28 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这都成系列了
该帖子作者被版主 samanthalas加 10积分， 2经验，加分理由：１１月份居民津贴！
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dahua1981
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2011/12/6 8:29:11 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
经验这东西有时候只可意会不可言传
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happy美丽
dyann
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2011/12/6 10:22:32 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 glucosides(glucosides) 发表:
鉴于平衡非常地麻烦，而且各种资料上面一谈到平衡，都得什么半小时一个小时以上。我对这些非常反感，分析柱，我一般平衡10分钟，顶多15分钟，撑死20分钟。平衡30分钟？见鬼去吧，浪费生命

我要发一篇体验，说说不同的平衡时间下，色谱峰的差异


期待~
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samanthalas
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2011/12/6 10:36:34 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
看来要搞清楚一个天然植物中，所有的化合物，这真是一个超级庞大的工作啊！再说，自然界的天然植物很多呀！
科学无止境啊！
人只能知道上帝创造之奥妙的一部分啊。
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glucosides
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2011/12/6 11:22:13 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 冷冷的冰雨(xy4585618) 发表:
楼主很高产  ！赞赞赞

平衡的时间长短和流动相有关系，要是按照楼主说的是以甲醇-水为流动相，平衡时间应该不会长，以本人经验判断最多十几分钟就可以搞定

是的冰雨，我经常听说什么要半小时，很久以前就怀疑
当然，可能是流动相不同的原因吧，有些需要平衡得久？
但我又一想，柱子才多少保留体积啊，转换过来不就好了

下一篇我一定要考察一下
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glucosides
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2011/12/6 11:23:10 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 samanthalas(samanthalas) 发表:
看来要搞清楚一个天然植物中，所有的化合物，这真是一个超级庞大的工作啊！再说，自然界的天然植物很多呀！
科学无止境啊！
人只能知道上帝创造之奥妙的一部分啊。


是的，呵呵，而且中药（不止中药）可以一直做
哪怕是同一味药，同样是提取分离，也能得到不同的发现
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