主题：【第六届原创】锁阳咖啡中咖啡因含量的测定

1.方法提要

样品用水溶解过滤后，用配有紫外检测器的高效液相色谱(HPLC)测定咖啡因，外标法定量。

2.试剂和材料

所有试剂除特殊注明外,均为分析纯,水为超纯水。

2.1 乙睛:色谱纯;

2.2 咖啡因标准品:纯度≥99%;

2.3 标准储备液(100m g/L),准确称取 。0.0100 g 咖啡因标准品于100m L容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，作为标准储备液。根据需要再用水将标准储备液稀释成适当浓度的标准工作液。

3.仪器和设备

3.1高效液相色谱仪配紫外检测器。

3.2超声波振荡器。

4.测定步骤

4.1 提取

称 取 0.1g(准确至 0.0001 g )均匀试样于 100m L容量瓶中，加人 80m L水，置超声波振荡器中超声20 min，冷却后用水定容至刻度并混匀，过0.45滤膜后，供HPLC测定。

4.2 测定

4 .2 .1 色谱条件

a) 液 相色谱仪，配紫外检测器，检测波长273n m;

b) 色 谱柱:C,。柱(25cm×4.6m mID,5um)柱或相当柱;

c) 流 动相:乙睛一水一乙酸(16+83十1);

d) 流 速 0.5 m L/min;

e) 进 样 量 5uL

4.2.2 色谱测定

根据样液中咖啡因的含量情况，选定峰面积相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中的咖啡因的响应值均应在仪器的检测线性范围内对标准工作溶液和样液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，咖啡因的保留时间约为9min。

                            标准溶液色谱图

              标准曲线

                            样品色谱图

4.2.3结果计算和表述

按式计算试样中咖啡因的含量，计算结果应扣除空白值:

                         

式中:

X— 试样中咖啡因的含量，单位为毫克每千克(mg/kg) ;

A— 样液中咖啡因的峰面积，单位为平方毫米(mm²);

Cs— 标准工作液中咖啡因的浓度，单位为毫克每升(mg/L) ;

V— 样液最终定溶体积，单位为毫升(mL) ;

As— 标准工作液中咖啡因的峰面积，单位为平方毫米(mm²);

m— 样品量，单位为克(g)。

5.结论：

    共检验4个样品，检出率100.0%，平均值为2.5mg/kg。