主题:【第六届原创】福利!!!GPC玻璃净化柱安装及测试

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温文尔雅
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GPC玻璃净化柱安装及测试



一、装柱


1 玻璃柱双密封圈柱塞


图2 璃柱底座和液体管路

  将图1密封活塞和图2玻璃柱底座及液路连接,如图3

活塞和管路连接

  将图3连接好后插入玻璃柱,如图4,之后将密封圈锁紧,与玻璃壁挤压,密封完好。


4活塞插入玻璃柱

  图5是装好的底座,图6是玻璃净化柱顶端可调节柱塞,带有很长的拉杆,方便调节活塞位置及柱内填料松紧度,由于填料粒径较大,所以柱压很小,新柱大约50Psi以内。


图5 安装好的玻璃净化住底座


图6 顶端柱塞

1、密封圈密封度调节螺母;2、柱塞在玻璃柱内上下调节螺母;3、玻璃柱端头锁紧螺母。

    填料S-X3用乙酸乙酯环己烷(1:1)浸泡,用玻璃漏斗将填料导入玻璃柱,之后两端密封完好,分别有两根管路输送流动相。

图7 装填好的玻璃柱

  玻璃柱填装好后接入GPC凝胶净化色谱系统,待柱内气泡排除之后,继续用乙酸乙酯环己烷(1:1)冲洗,直到紫外检测器基线相对稳定。

  小贴士:装填好的玻璃净化住准备测试,流路方向与装填方向相反,把填装过程底端翻转过来可以减小压力。

二、分离度测试


采用不同分子量的标准品进行测试。大分子物质最先流出净化住,小分子最后流出。


仪器:GPC600           

流动相:乙酸乙酯/环己烷 (1:1  )

流速:5mL/min





结论:以上图谱中四个组分均有很好的分离度,所以所装填的玻璃柱可以达到要求。

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温文尔雅
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延伸与讨论

  装柱完成后,又开展了苏丹红和和2,4二硝基苯肼的分离实验。

  选用苏丹红I、II、III、IV和2,4二硝基苯肼进行混合,溶液呈砖红色,进行GPC净化。



新装的玻璃柱连接GPC600进行分离


分离过程

实验条件



仪器:GPC600           

流动相:乙酸乙酯/环己烷 (1:1  )

流速:5mL/min 




问题来了:
已知GPC凝胶净化色谱分离原理是利用凝胶孔的空间尺寸效应,所以大分子物质从凝胶颗粒四周经过因而走的路径较短,相反,小分子走的路径较长,所以溶质按分子大小依次流出。但上述试样中苏丹红分子量大于2,4二硝基苯肼,理论上是苏丹红先流出,而实验中却正相反,为何?求解释......

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2013/12/25 15:17:30 Last edit by v2760943
温文尔雅
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zl2008xz
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楼主手动型很强啊,玻璃净化柱原来可以这样制作,分离过程还可以看到,第一次看到,很不错,支持,记得之色谱可以分离胡萝卜素,楼主有兴趣可以做做看能分开吗,期待玻璃柱五颜六色的分离过程,做实验也很有趣吗!希望可以看到玻璃柱上分离的效果,太直观了,支持楼主啊!
透明
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温文尔雅
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原文由 zl2008xz(zl2008xz) 发表:
楼主手动型很强啊,玻璃净化柱原来可以这样制作,分离过程还可以看到,第一次看到,很不错,支持,记得之色谱可以分离胡萝卜素,楼主有兴趣可以做做看能分开吗,期待玻璃柱五颜六色的分离过程,做实验也很有趣吗!希望可以看到玻璃柱上分离的效果,太直观了,支持楼主啊!
多谢支持!!!
温文尔雅
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原文由 透明(zsj201204) 发表:
安装步骤很详细,还有测试结果,不错
还有延伸问题呢,难道没人遇到这种情况吗
透明
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原文由 温文尔雅(v2760943) 发表:
原文由 透明(zsj201204) 发表:

安装步骤很详细,还有测试结果,不错
还有延伸问题呢,难道没人遇到这种情况吗


别的柱子也是这样?
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2013/12/31 12:36:24 Last edit by zsj201204
温文尔雅
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原文由 温文尔雅(v2760943) 发表:
原文由 透明(zsj201204) 发表:

安装步骤很详细,还有测试结果,不错
还有延伸问题呢,难道没人遇到这种情况吗


别的柱子也是这样?
做了几遍都是这个出峰顺序
wulin321
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温文尔雅
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