液相-离子阱质谱联用法用于赖诺普利片的杂质分析
本试验采用高效液相-质谱联用法对赖诺普利片的两种微量杂质进行的分析,本方法分析准确方
法灵敏。我们对杂质碎片进行了分析定性。
赖诺普利是口服降压药,是依那普利拉的赖氨酸衍生物,具强力血管紧张素转换酶抑制作用。
其特点为在体内不经肝脏转化即可产生药理效应,作用出现迟,但维持作用时间长而平稳。中文别
名苯丁赖脯酸、苯丁赖普酸、赖脯酸。化学名称为N-(N-[(S)-1-羧基-3-苯丙基]-L-赖氨酰)-L-脯氨酸二
水合物。
赖诺普利是一种肽类的二肽酶抑制剂。它可抑制血管紧张素转换酶(ACE),后者可催化血管
紧张素I转换为血管收缩肽,即血管紧张素II。血管紧张素II可刺激肾上腺皮质分泌醛固酮。抑制ACE
可使血管紧张素II浓度降低从而使升压作用及醛固酮分泌下降。后者的降低导致血清钾的升高。赖诺
普利主要通过抑制肾素-血管紧张素-醛固酮系统降低血压,同时赖诺普利亦对低肾素性高血压有
降压作用。
药物杂质分析是药品安全评价的一项重要内容,为了安全起见,药品中超过0.1%的的杂质在临
床前试验必须进行分析鉴定。本试验通过多级质谱对自研品种赖诺普利片的杂质进行了分析鉴定。
材料和方法:赖诺普利片为本实验室自制,醋酸铵、冰醋酸(分析纯),购自天津。乙腈(色
谱纯)(迪马科技),实验用水为实验室自制。
分析液相:安捷伦1200配VWD检测器,菲罗门色谱柱4.6 mm×150×mm×5um,流动
相:10%乙腈和90%(V / V)水(缓冲液),缓冲液(20 mmol/L乙酸铵以乙酸调节pH至4.5。流
速1.0ml/min,检测波长220nm。
样品制备:将赖诺普利片10片研磨成细分,精密称定100mg细粉于100ml的容量瓶中,加入流动
相超声提取30分钟,0.22um滤膜过滤,备用。
质谱:高压液相色谱- 电喷雾质谱,安捷伦液相配有bruker离子肼质谱仪,离子源温度250
度,ESI喷针电压4.0千伏,干燥气体流速10ml/分钟。
HPLC / MS分析:
赖诺普利的高效液相色谱图如下;
杂质1与赖诺普利m/z 291的三级裂解质谱MS3无差别如下图:
裂解质谱显示m / z 291的离子就产生了一个大的裂解产物在m / z245,可以推断为丢失了一个HCOOH,两者的m / z245的质谱再次裂解情况也证实了如上结论(如下图:)
对杂质1的裂解途径进行了一下推导:
杂质2、其呈现m / z为309的阳离子,同样在赖诺普利质子CID谱也呈片段
离子m / z309,这可能是一个6氨基2-(1-羧基-3苯丙氨基)-己酸结构单元,进一步裂解质谱如下:
可以看出杂质2与赖诺普利的m/z 309离子进一步裂解无差别。m/z 292显示m/z 309离子丢失一个NH3结构。
杂质1和杂质2的碎片离子如下表所示:
结果讨论:
1、 响药品质量的主要因素之一是药品杂质,药品的杂质是药品不具治疗作用,或对人体有危
害或影响药品质量的物质,因此,杂质检测是控制药品质量的一项重要指标,本实验对于赖诺普利
稳定性研究中产生的两个微量杂质进行了分析和鉴定,对于杂质产生原因的追究及杂质产生的避免
等进一步研究奠定了基础。
2、 本方法快速、准确,对于其他药物杂质分析具有借鉴意义。
3、 杂质结构基本是可以确定的,条件允许的话进一步证实可采用NMR的方法。