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毛细管电泳（CE）
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主题：【已应助】CE分离花青素

浏览0 回复8 电梯直达
安静地生活
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发表于：2015/01/21 16:30:58 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
CE分离花青素用的是酸性条件，磷酸缓冲液pH2.1添加CTAB 0.25mM,-25kV ,520nm PDA检测器，毛细管内径75um,长72cm.结果显示，电流-200mA,与文献报道-70mA相差很大，文献用的毛细管内径50um,会造成这么大的电流差异吗？求解!
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2015/1/21 21:40:22 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
你用的毛细管内径75um，原则上电流会比50um的翻倍还要多一些。再加上长度测量有点误差，你的电流并不算离谱。
但是对于一个稳定的方法来说，它的电流是不应该太大的。因为焦耳热会影响分离的重现性。
我建议你换成50内径的管子。
该帖子作者被版主 nini2006加 3积分， 2经验，加分理由：应助
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nini2006
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2015/1/21 22:37:02 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
CEcret专家说得很对。内径变化电流也会变化非常大。分离小分子有机物，一般50 um的用的比较多。
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安静地生活
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2015/1/22 10:55:33 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
感谢！今天将缓冲液浓度降低了1倍，同时将样品用十分之一的缓冲液稀释一倍，结果有好一点的分离，但在15分钟以后，出现基线上漂的现象，何解？
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nini2006
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2015/1/22 11:32:37 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 安静地生活(v2972267) 发表:
感谢！今天将缓冲液浓度降低了1倍，同时将样品用十分之一的缓冲液稀释一倍，结果有好一点的分离，但在15分钟以后，出现基线上漂的现象，何解？
基线漂移很正常。有时候柱子状态不太好也会这样，多冲一冲，或多走几针有可能就好了。
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CEcret
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2015/1/22 13:32:19 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 安静地生活(v2972267) 发表:
感谢！今天将缓冲液浓度降低了1倍，同时将样品用十分之一的缓冲液稀释一倍，结果有好一点的分离，但在15分钟以后，出现基线上漂的现象，何解？


你用50内径的毛细管，电流直接减半，分离度直接改善。
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安静地生活
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2015/1/28 9:44:52 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
换了50内径的毛细管，今天再看看
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cpudaxiao
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2015/1/28 10:31:01 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
建议把磷酸盐缓冲液的组成核实一下。一般用磷酸二氢钾，也有文献用生物培养用的PBS配方，有四五种盐吧。盐种类多，虽然是电中性，但是电流自然大。
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安静地生活
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2015/1/29 9:11:27 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
感谢，马上去核实！
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