主题：【第十届原创】液相色谱-三重四级杆质谱仪测定茶叶中草甘膦残留量 的方法研究

1实验目的
    本文对茶叶中的草甘膦残留经提取以及WAX和MCX固相萃取柱的净化，应用HPLC-QQQ进行定量分析，通过重复性、线性关系和回收率等参数进行考察，所建立的方法能对草甘膦进行快速、高灵敏的检测分析。
2材料与方法
2.1材料和试剂
草甘膦标准品（纯度≥，Dr.Ehrenstorfer），甲醇（色谱纯），氨水（优级纯）, 原乙酸三甲酯：色谱纯，实验用水均为超纯水。
2.2仪器设备
液相色谱-三重四级杆质谱联用仪：Agilent 1290-6460
MCX固相萃取柱：150mg  6mL，CNW
PWAX固相萃取柱：150mg  6mL，CNW
3 实验部分
3.1样品处理
称取已粉碎好的茶叶试样2.5g置于离心管中，添加标准中间液，10mL二氯甲烷，水25mL，均质，水5mL清洗刀头，抽滤，水10mL提取残渣。5等分滤液，待净化。
MCX和PWAX（150mg/6mL）依次用5 mL甲醇、5mL水平衡，将平衡后的MCX与PWAX上下串联，将3.1的样液加载至MCX串联柱上，流出物弃去；5mL 水淋洗柱，弃去，弃去MCX柱，用5 mL甲醇淋洗PWAX柱，减压抽干3min，用10mL 5%氨水/甲醇洗脱接收，40-45℃减压蒸干。
加入0.5mL乙酸溶解残渣，转入到15mL离心管中，加入2mL原乙酸三甲酯溶解残渣，合并溶液，涡旋1min，100℃加热2小时进行甲基衍生化反应，转移到50mL旋转蒸发瓶中，甲醇洗离心管合并到50mL旋转蒸发瓶中，50℃减压浓缩至干，1mL 50%甲醇/水定容，待测。
3.2仪器条件
3.2.1色谱条件
a. 色谱柱：Agilent Poroshell 120 EC-C18 3.0X100mm，2.7-Micron；
b. 流动相及其梯度
流速：0.4mL/min

时间（min）	0.1%甲酸+2mMol/L乙酸铵水溶液（%)	甲醇(%)
0.00	95	5
1.00	95	5
6.00	10	90
8.00	10	90
9.00	95	5
10.00	95	5

3.2.2 质谱条件
a) 离子源：ESI源；
b）扫描方式：正离子扫描；
c）检测方式：多反应监测；
e）电喷雾电压：4000V；
d）雾化气温度：350℃；
f）雾化气流速：10L/min；
g）雾化气压力：40psi；
h）定性离子对、定量离子对、提取电压以及碰撞气能量等见表。

名称	Q1	Q3	提取电压 V	碰撞能量 V
草甘膦	254	152	95	10
	254	102	95	10
	254	74	95	20

3.3实验结果
将草甘膦分别反应浓度为50μg/kg、100μg/kg、200μg/kg、500μg/kg、1000μg/kg的标准曲线，以峰面积y为纵坐标，浓度x为横坐标，绘制标准工作曲线方程为：y=3037.390732x+26813.423347，相关系数R2=0.99969630。茶叶样品中草甘膦的浓度为0μg/kg，添加浓度为100μg/kg，添加回收浓度为76.325μg/kg，回收率为76%。

标准品线性方程

浓度为100μg/L标准溶液谱图

                加标样品的色谱图

        空白样品的色谱图