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主题：【求助】关于乳铁蛋白检测的问题

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瓜西西

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发表于：2018/01/19 15:52:15 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

最近开发了一个关于乳粉中乳铁蛋白检测的方法，结果发现了两个问题，造成的困扰很大，请各位支招
1、检测发现产品有两个峰（挨的很近），查文献资料乳铁蛋白是有多种构型其中两种含量比较多，其分子量差异不大（84K与80K）。但对照品市场只能购买一种构型对照（还未标识是那种构型），我用这种对照去定量两个峰是否可行？请从方法合规性上分析
2、采用的方法是梯度洗脱，刚好目标峰出在梯度峰一个时间，使用空白和不进样已经确认是梯度峰。尝试改变梯度，目标峰出的很差，所以非常纠结。这个梯度峰存在对方法合规性来说影响大吗？从定量角度来说应该是不影响定量的。

该帖子作者被版主 夏天的雪加 2积分， 2经验，加分理由：鼓励发帖

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2018/1/19 16:50:23 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

第二个问题感觉会影响的，还是要优化一下条件分开。

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夏天的雪

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2018/1/22 9:50:01 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

标准品只有一种构型，测定出来是一个峰还是两个峰，判断标准品是单标还是混标，如果是单标，那么去定量两个峰感觉是有问题的，如果是混标，有可能是测定总量，或许可以；问题2中溶剂峰和待测物质同时出峰，肯定会影响定量的，尤其在低浓度的时候

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m3328503

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2018/1/22 13:14:17 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

我们检测乳粉中的乳清蛋白，乳铁蛋白没有做过

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瓜西西

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2018/2/5 11:43:41 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 飘殇(zx08052109) 发表:
第二个问题感觉会影响的，还是要优化一下条件分开。

方法已经优化无数次了，搞不定，使用的是肝素的柱子，很短。调整比例要么峰宽很宽，无法定量，要么就是梯度峰和目标峰一起。
检测蛋白质用液相方法就是个坑啊
之前的IGG一样

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2018/2/5 11:47:33 地板管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 夏天的雪(bingwang228) 发表:
标准品只有一种构型，测定出来是一个峰还是两个峰，判断标准品是单标还是混标，如果是单标，那么去定量两个峰感觉是有问题的，如果是混标，有可能是测定总量，或许可以；问题2中溶剂峰和待测物质同时出峰，肯定会影响定量的，尤其在低浓度的时候

1、对照只有一个峰，但是样品出来两个峰。跟试剂盒方法做对比，两个峰积分结果才一致。但是试剂盒挺贵的
2、溶剂峰和目标峰重叠，我个人觉得没啥影响啊。因为使用曲线校正的，如果对样品有增量贡献，同时也会对对照有增量贡献，这两种贡献应该是相互抵消的。除非样品含量过低，低于定量限。

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2018/2/5 11:48:07 6楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 m3328503(m3328503) 发表:
我们检测乳粉中的乳清蛋白，乳铁蛋白没有做过

乳铁蛋白是乳清蛋白里面的一小小部分

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2018/2/12 14:19:27 7楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 瓜西西(v2715441) 发表:
1、对照只有一个峰，但是样品出来两个峰。跟试剂盒方法做对比，两个峰积分结果才一致。但是试剂盒挺贵的
2、溶剂峰和目标峰重叠，我个人觉得没啥影响啊。因为使用曲线校正的，如果对样品有增量贡献，同时也会对对照有增量贡献，这两种贡献应该是相互抵消的。除非样品含量过低，低于定量限。

1、样品两个峰积分结果相加才一致，那么对照品只有一个峰，用该对照品的峰面积定量应该会有区别了。试剂盒是特异性检测，两种构型可能都能检测出来，如果对照品只有一个峰，只有一种物质；
2、溶剂峰和目标峰重叠对定量会有影响，不一定要低于检出限，就如同做标准曲线时空白不能过零点，空白高会出现截距高

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