主题：【第十二届原创】浅谈检测标准的方法验证

浅谈检测标准的方法验证

摘要:在标准方法被实验室使用前，实验室应证明自己的人员、设备设施等符合标准方法的要求，
并且能够正确应用该方法检测相应的样品并提供证据证明结果有效。
本文将USP、ISO、ICH以及GB/T27417和HJ-168-2010中提及需要验证的参数进行比较并且对方法验证中的参数选择进行指导，
最后对方法验证方案制定和实施的整个流程进行阐述。

1、方法验证的性能参数
1.1美国药典公布了用于化合物评价的方法验证的具体准则。
USP定义了验证的八个步骤：
准确度
精密度
特异性
检出限
定量限
线性范围
耐用性
稳定性
The USP has published specific guidelines for method validation for compound evaluation . USP defines eight steps for validation:
Accuracy
Precision
Specificity
Limit of detection
Limit of quantitation
Linearity and range
Ruggedness
Robustness
1.2 ISO/IEC17025 、CNAS-CL:2018有包括一个关于方法验证的章节，其中有九个验证参数列表。
测量范围
准确度
结果的测量不确定度
检出限
定量限
方法的选择性
方法线性
方法重复性或复现性
抵御外部影响的稳健度或抵御来自样品或测试物基体干扰的交互灵敏度以及偏倚
1.3 ICH开发了一个关于分析程序验证的一致性文本。该文档包括八个验证特性的定义。ICH还制定了详细的方法指导。
准确性、
精密度、
重复性、
中间精密度、
特异性、
检出限、
定量限、
线性范围
accuracy
precision
repeatability
intermediate precision
specifiity
detection limit
quantitation limit
linearity
range
1.4 GB/T27417合格评定 化学分析方法确认与验证指南中也规定了至少八个参数。
检出限，定量限，
选择性，
灵敏度，
线性范围，
基质效应，
精密度，
准确度，
测量不确定度等等
1.5 HJ168-2010中规定了以下几个参数。
检出限
精密度
准确度
不确定度
2、方法验证参数的选择
2.1参数的选择
2.1.1必须确定的参数。
由上面几种方法验证的指导方法中可以看出，检出限、精密度、准确度是必不可少的三个参数。
2.1.2标准方法中规定的参数。
定量限、测量不确定度如果在标准方法上规定了就必须进行，如果没有规定，可不进行定量限的确定，
但是需要一个领域至少做一个测量不确定度的案例。 标准中如果出现标准曲线，则线性范围应该要进行确定，如果没有，可以进行，也可以不进行参数的确定。

2.1.3一般不进行确认的参数，但特殊情况下仍需进行确认的参数。
基质效应、选择性、特异性等参数，如果涉及到基质影响大、样品内部和外部干扰严重的情况则需要进行确定。
2.2参数的确认
  2.2.1检出限和定量限
  检出限确定的方法基本上有空白添加目标物、空白标准偏差、3倍的低浓度标准偏差除以斜率、信噪比，
定量限则由空白值加上10倍的标准偏差或者3倍检出限来确定。

2.2.2准确度和精密度
准确度一般采用有证参考物质、加标回收实验、方法比对进行确定。精密度可以通过标准偏差、变异系数以及再现性来确定。
2.2.3 线性范围
对于标准中已知标准曲线的制作按照标准中制作即可，对于标准中未提及的标准曲线的制作，需要至少6个标准曲线点（包括零点），每个浓度点至少测定两次以上。
2.2.4选择性和特异性、基质效应
通过空白基质分析、空白基质加标、选取多种基质测定的方式进行确定。
2.2.5测量不确定度
目前主要是通过GUM法和非GUM的方法进行确定。
3、方法验证的方案制定与实施
  3.1方法验证前的准备
3.1.1人员
在方法验证前，参加验证的操作人员应熟悉和掌握方法原理、操作步骤及流程，应接受仪器和方法的培训，培训后进行考核并授权才可以进行方法验证操作。
3.1.2仪器设备、耗材、标准物质
方法验证过程中所用的试剂和材料、仪器和设备及分析步骤应符合方法相关要求，试剂、耗材、仪器设备需通过验收，必要的仪器设备需通过检定校准。
3.1.3样品和环境条件
  方法验证过程中包括采样、制样、样品的运输和保存都必须满足相应的条件，采样及前处理、上机过程中的环境条件也应满足条件。
3.2方法验证方案的制定
3.2.1标准方法验证的提出
由市场销售业务人员根据实际检测活动中出现的因项目不全等原因提出标准方法的扩项需求。
3.2.2 标准方法验证的审批
由检测人员或者标准评审人员根据检测方法所需设备、人员等方面进行总结和分析评估，提出方法验证的申请，交由技术负责人进行审批，总经理批准。
3.3方法验证的格式
3.3.1封面
主要有标准方法的名称、测试人、批准人、日期等内容。
3.3.2简述
主要包括方法的介绍、原理、适用范围、依据、验证的参数及评价指标
3.3.3实验准备
实验准备主要包括人员情况登记和人员授权表、设备编号及检定校准编号和有效期、试剂和耗材的生产厂家、规格、级别，标准品厂家、批号、编号和样品的信息。
3.3.4实验过程
实验过程包括采样、前处理、标准品配置、上机过程以及上机条件的设定以及数据处理。
3.3.5参数的确定
各参数的确定过程、数据以及判定是否符合标准要求。
3.3.6质量控制
包括采样器皿准备、样品保存条件、样品保存期限、替代物回收范围、空白加标回收率范围、样品加标回收率范围、加标分析频次、实验室空白分析频次、仪器连续校准分析频次、检出限确定方法等
3.3.7结论
包括方法各特性指标是否达到预期要求、验证过程中出现的异常情况处理，如检出限大于标准方法要求、曲线点范围扩大和缩小，样品的取样量、稀释倍数等，方法的建议及改进。
最后附上原始记录，交由技术负责人签字批准即可。