实战宝典 原创大赛 仪器问答 仪友会 总帖：8067157今日发帖：181 我的社区 签到
快速导航 采购仪器 提醒
液质联用（LCMS）
版主:
入住本版
专家:
居民列表

主题：【已应助】SPE C18脱盐

浏览0 回复7 电梯直达
p3311681
头像
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
发表于：2019/09/02 17:52:36 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
请教大伙一个问题，关于SPE C18脱盐
我的样品是小鼠肝全蛋白，经过胰酶酶切和定量标记后想在上液质前脱盐。用的是waters的Sep Pak C18脱盐柱，样品和填料比为1:1000。
流程如下：
活化：1、1mL 100%乙腈
          2、1mL 50%乙腈/50%水
平衡：0.1% FA，10倍柱体积
上样：样品用FA调至3~4，加入萃取柱中，使其按重力自然流出
清洗：1mL 0.1% FA，洗盐
洗脱：1mL 洗脱液（50%乙腈，0.1% FA），静置2min后，洗脱样品
回收穿过液，清洗液和洗脱液测肽段浓度，用的是thermo家的肽段定量试剂盒。回收效率只有60~70%。请问该如何改进流程？
该帖子作者被版主 welewolf加 2积分， 2经验，加分理由：鼓励发帖
为您推荐
近期热榜
热门活动
您可能想找: 固相萃取仪、固相萃取装置 询底价
选参数 看心得 找厂商 查方案
专属顾问快速对接
立即提交
相关阅读
welewolf
v2823651
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2019/9/2 19:22:36 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
建议尝试优化洗盐和洗脱步骤的溶剂用量。可以提高回收率的
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
hujiangtao
hujiangtao
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2019/9/2 20:51:05 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这么复杂的基质 这个回收率可以了
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
p3311681
p3311681
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2019/9/3 5:47:53 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由welewolf(v2823651)发表:建议尝试优化洗盐和洗脱步骤的溶剂用量。可以提高回收率的
是不是可以适当减少洗盐溶剂用量，因为肽段定量的时候发现有20%肽段在洗盐过程中被提前洗脱。那同时又应该怎么避免由于洗盐溶剂减少可能导致的脱盐不充分情况呢？感谢您的回复！
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
p3311681
p3311681
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2019/9/3 5:51:13 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由hujiangtao(hujiangtao)发表:这么复杂的基质 这个回收率可以了
感谢回复！但其实还是有些担心由于脱盐损失的样品导致后续二甲基定量检测蛋白差异的时候有误差，或者是引起的结果不稳定啊
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
welewolf
v2823651
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2019/9/3 8:37:35 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 p3311681(p3311681) 发表:
是不是可以适当减少洗盐溶剂用量，因为肽段定量的时候发现有20%肽段在洗盐过程中被提前洗脱。那同时又应该怎么避免由于洗盐溶剂减少可能导致的脱盐不充分情况呢？感谢您的回复！
如果脱盐步骤的洗液不能减少，那只能增加洗脱步骤的洗液试试了；不过你现在的回收率也是可以接受的，只要相对标准偏差<10%即可。
赞贴
1
收藏
0
拍砖
0
举报
Ins_d5ddec35
Ins_d5ddec35
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2021/11/28 14:45:58 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
最近我也是用waters 的SEP 小柱除盐，用肽段检测试剂盒一测除盐液中也有肽段，甚至上样液自然重力流出的液体里面也有，哭泣，我用3ml 0.1%TFA，我还害怕盐冲不掉现在样品都给我冲出来了，盐还不知道除没除去
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
lijing320323
lijing320323
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2021/11/28 22:53:21 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
咨询工程师
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
手机版： SPE C18脱盐
猜你喜欢最新推荐热门推荐更多推荐
头像
高级回复 发表评论
品牌合作伙伴
岛津
日立科学仪器
珀金埃尔默仪器（上海）有限公司（PerkinElmer）
日本电子株式会社
丹纳赫
安捷伦
赛默飞世尔科技
普析通用
欧波同
天美
天瑞仪器
德国耶拿
海能技术
马尔文帕纳科
磐诺科技
上海仪电科仪
梅特勒托利多
聚光科技
莱伯泰科
盛瀚
多宁生物
丹东百特
科哲
卓立汉光
屹尧科技
华谱科仪
宝德仪器
优莱博
HORIBA
布鲁克核磁