主题：【第十七届原创】采用 InfinityLab Poroshell 120 SB-C18色谱柱分析溴化丁基胶塞中的抗氧剂

采用 InfinityLab Poroshell 120 SB-C18色谱柱分析溴化丁基胶塞中的抗氧剂

张永梅

（重庆市计量质量检测研究院，杨柳北路1号 401123）

前言：

溴化丁基胶塞具有耐热、弹性良好、阻隔性佳和硫化速度快等优点^[1]，在注射剂用密封件中广泛使用^[2]。药用溴化丁基橡胶塞是与药品直接接触的包装材料，是注射用粉针包装密封材料的一部分，具有化学惰性高阻隔性低萃取性和良好的生物性能，胶塞由生胶与抗氧剂填充剂等助剂混合均匀经高温加压而成，抗氧剂可延缓或抑制橡胶产品的老化并延长其使用寿命^［3-5］，胶塞本身是立体网状多孔结构，在与药物接触时，胶塞中的化学成分，可以从胶塞内部迁移至胶塞的表面，污染药物，药中残存的各种有机溶剂可以萃取胶塞成分^［6,7］，从而影响药品质量，对人体健康产生危害^［8］。本方法采用了安捷伦液相色谱柱，并对方法进行优化，现将实验结果报告如下，以供参考。

1 试验材料与方法

1.1 仪器与试剂

1290/6470B超高效液相串联三重四级杆质谱联用仪（Agilent公司）；乙腈、甲醇、乙醇、甲酸、甲酸铵均为LC-MS级（上海安谱璀世标准技术服务有限公司）； 氯化钠为优纯级（成都市科隆化工试剂厂）；抗氧剂1310（北京曼哈格生物有限公司）、抗氧剂BHT-COOH（河北百灵威超精细材料有限公司）、抗氧剂1035和抗氧剂1222（广州佳途科技股份有限公司）。

1.2 仪器条件

色谱条件：InfinityLab Poroshell 120 SB-C18柱（2.1x100mm 2.7-Micron）；流速0.3 mL/min；进样量3 μL；柱温40℃；流动相A： 0.02%甲酸水溶液（含5mM甲酸铵）； 流动相B：甲醇

质谱条件：ASJ ESI离子源；鞘气温度300℃；鞘气流速11 mL/min；干燥气温度300℃；干燥气流速6 mL/min；多反应监测模式(MRM)，监测离子与出峰时间见表1。

表1 4种抗氧剂的监测离子与保留时间

1.3 试验样品

市售溴化丁基胶塞（生产厂家A、B、C），样品均为市场采购。

1.4 试验方法

1.4.1 标准储备液的制备

准确移取适量上述标准溶液并用乙腈定容至 25mL，使成为 1000mg/L 的标准储备液， 4℃避光条件下保存。

1.4.2 混和标准工作液的制备

分别吸取不同体积的储备液，用乙腈配制成抗氧剂1035、抗氧剂1222浓度为2.0 ng/mL、5.0 ng/mL、10.0 ng/mL、20.0 ng/mL、30.0 ng/mL、40.0 ng/mL、50.0 ng/mL；抗氧剂1310、抗氧剂BHT-COOH浓度为10.0 ng/mL、25.0 ng/mL、50.0 ng/mL、100.0 ng/mL、150.0 ng/mL、200.0 ng/mL、250.0 ng/mL的混合标准工作溶液。

1.4.3 胶塞提取溶液的制备

将溴化丁基胶塞剪碎后混匀，称取10 g置于50mL的聚四氟乙烯瓶中，加入20%乙醇水溶液50 mL，放入80℃条件下提取2h，量取2.0mL提取液于10mL具塞刻度试管中，准确加入2.0mL乙腈，摇匀，再加入一定量的氯化钠使其分层，涡旋振荡萃取1min，静置分层，取有机层过0.22μm滤膜，取续滤液待测。

1.4.4 测定

按 1.2 操作进行，以保留时间定性，外标法定量。

2 结果与讨论

2.1 色谱条件的选择

以InfinityLab Poroshell 120 SB-C18柱（2.1x100mm 2.7-Micron）作为分析柱，以 0.1%甲酸水溶液-甲醇和 0.02%甲酸水溶液（含5mM甲酸铵）-甲醇为流动相进行 HPLC 条件的优化。实验发现，以0.1%甲酸水溶液作为流动相分析，抗氧剂1310和抗氧剂BHT-COOH响应低；而0.02%甲酸水溶液（含5mM甲酸铵）作为流动相，抗氧剂1310和抗氧剂BHT-COOH响应提高。故选用.02%甲酸水溶液（含5mM甲酸铵）-甲醇作为流动相，一次分析仅需 8min。

2.2 方法的线性范围和检出限

混合标准工作液的测定按照 1.4 的操作步骤，以待测物的定量离子峰面积（y）对浓度（x，ng/L）进行线性回归计算，绘制标准曲线，本方法中抗氧剂1310和抗氧剂BHT-COOH的线性范围为 10～250ng/mL；本方法中抗氧剂1035和抗氧剂1222的线性范围为 2～50ng/mL，回归方程与最低检出限（信噪比为 3：1）结果见表2。标准工作溶液的总离子流色谱图见图 1。标准工作溶液的多反应监测色谱图见图3。

2.3 方法的加标回收率和精密度

取上述 1.4.3中空白样品 2.0mL，分别添加混合标准储备液，使得样品中 4 种抗氧剂的浓度设置0.1mg/kg、0.5mg/kg 两个水平，按样品前处理操作，方法的加标回收率和精密度结果见表 2，样品总离子流色谱图见图 2。样品的多反应监测色谱图见图3。

表2 4种抗氧剂回归方程、相关系数、回收率、精密度和检出限（n=3）

谱图

图1 4种抗氧剂标准工作液总离子流色谱图（抗氧剂1310和抗氧剂BHT-COOH的浓度为100ng/mL，抗氧剂1035和抗氧剂1222的浓度为20ng/mL）

图2 20%乙醇水溶液中4种抗氧剂加标总离子流色谱图（抗氧剂1310和抗氧剂BHT-COOH的浓度为100ng/mL，抗氧剂1035和抗氧剂1222的浓度为20ng/mL）

图3 标准工作液和20%乙醇水溶液加标中4种抗氧剂多反应监测色谱图（抗氧剂1310和抗氧剂BHT-COOH的浓度为100ng/mL，抗氧剂1035和抗氧剂1222的浓度为20ng/mL）

3. 结论