要做验证的,并且实验条件都要重新调整,不然会出问题。
0.32口径换成0.25口径,一般认为有两个变化,一是柱流速要减小,二是柱效提高,分离会变好,其实不然,变化会很复杂。
0.25口径柱效高是理论上的,只有在理想情况下测试才表现出更高柱效,实际应用中与实验条件有关。特别是分流比,如果分流比不够大,导致初始带宽增加,就无法发挥出更高的柱效。
更重要的是“相比率”变了,也就是固定相的比例更多了。内径减小,但是膜厚不变,看起来变化不大,其实柱内的流动相相对减少,固定相就相对增加,也就是“相比率”减小,实际上是保留能力变强了。如果保持线速度不变,则出峰时间变长,程序升温条件下表现为流出时对应的温度更高。在极性柱上温度对选择性影响很明显,流出温度的变化很可能影响分离效果。
柱子内径由0.32变化为0.25之后,调整步骤一般是这样的:首先调小柱流量,一般需减小到原来的60%~80%,以保持线速度与原来一致为准。然后降低升温速率至原来的80%,比如原来10度/min,现在改为8度/min。第三是在原来的基础上提高分流比,因为柱流量减小了,如果分流比保持不变,实际上是总流量减小了,初始带宽会增加,导致峰变宽,所以分流比应该比原来增加50%~100%才能有好的效果。
这样调整后最重要的问题是灵敏度有一定损失,所以重新验证检出限是必须的。
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