1.黄芪多糖的精制

取黄芪药材粉末约30.0 g，精密称定，加入石油醚（60～90 ℃）100 mL回流提取3次，每次1 h，弃去提取液（除去脂溶性成分），药渣烘干，用70 %乙醇150 mL回流提取3次，每次2 h。弃去提取液（除单糖、低聚糖和苷类等小分子物质），药渣烘干，加蒸馏水200 mL回流提取3次，每次2 h。合并提取液，减压浓缩至100 mL，即得粗多糖的水溶液。在粗多糖水溶液中加入Sevage试剂（氯仿：正丁醇 = 4：l）10 mL，剧烈震荡20 min，使其充分混合，在4000 rpm转速下离心5 min，弃去中间变性蛋白层和下层有机层，水相继续重复上述操作10次，直至水相与有机相中间无变性蛋白出现为止，即得脱蛋白多糖水溶液。

向脱蛋白多糖水溶液中加入5倍量无水乙醇80mL（使溶液含醇量达80 %以上），充分搅拌，静置过夜。在4000rpm转速下离心5 min，弃去上清液，所得沉淀依次用无水乙醇、丙酮、无水乙醚20mL各洗涤3次，弃去有机溶剂后挥干沉淀，并用真空干燥机抽真空，60 ℃干燥12h，得到灰白色颗粒状多糖样品。

黄芪多糖精制的工艺流程图见图1。

Fig.1 The isolationprocedure of the polysaccharide in Radix Astragali.

2.黄芪多糖的纯度检查

2.1 Molish 试验

（1）供试品溶液：取黄芪多糖2mg，加10mL 蒸馏水，微热使溶解，再加入α-萘酚；

（2）阳性对照品溶液：取淀粉2 mg，加10 mL 蒸馏水，加热溶解，再加入α-萘酚；

（3）阴性对照品溶液：10 mL 蒸馏水，加α-萘酚。

分别摇匀，将试管倾斜，沿试管壁慢慢加入浓硫酸，竖直试管观察。供试品溶液与阳性对照品溶液试管中呈紫堇色环，阴性对照品溶液试管界面无变化。结果表明供试品溶液为糖类。

2.2 Fehling 试验

Fehling试剂的配置：称取CuSO₄^.5H₂O7.28 g，加水至40 mL，0.1 mL 浓硫酸酸化，再加水至100 mL作为甲液；称取酒石酸钾钠34.6 g，氢氧化钠14.2 g，加水至100mL 作为乙液。临用时将甲、乙液按1:1混匀即可。

（1）供试品溶液：取黄芪多糖2 mg，加10 mL 蒸馏水，微热使溶解；

（2）阳性对照品溶液：取葡萄糖2mg，加10mL 蒸馏水，微热使溶解；

（3）阴性对照品溶液：10 mL 蒸馏水。

分别加入Fehling试剂，在70℃水浴中加热10 min。供试品溶液与阳性对照品溶液为蓝色，阴性对照品溶液变为砖红色。单糖与Fehling试剂反应变为砖红色，而多糖为非还原性糖，不与Fehling试剂反应，结果表明供试品中不含单糖。

2.3显色条件

总多糖的测定：精密量取对照品溶液或供试品溶液0.5mL于具刻度试管中，加水补至1.0mL，再加入8%苯酚溶液1.0mL，充分混匀后，加入浓硫酸5.0mL，60 ℃水浴加热15 min，取出，冷却至室温后，于487nm下测定吸光度，外标一点法测定多糖含量。

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主题：【第十四届原创】黄芪总多糖的精制与含量测定