主题:【原创】HPLC-色谱峰出现肩峰,拖尾

浏览0 回复39 电梯直达
Ins_15dbe0d9
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时隔几个月,换了根柱子再次出现下面这个情况
色谱柱:waters symmetry  shield rp18
流动相:0.05%磷酸水-乙腈
每次使用后高水比例冲洗,跑了30多针,5针洗一次,只有轻微的拖尾
跑拖尾这针之前的人,用的流动相是pbs(上次也是),我就用纯水把仪器冲了2h,乙腈30min我才开始跑我的样,结果就这样了。
而后我洗了柱子,热水冲了系统,柱子乙腈冲了一晚上,结果从拖尾变成肩峰了
我真的无语了,到底是怎么回事啊
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等一个晴天
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Ins_15dbe0d9
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原文由 等一个晴天(m3170710) 发表:柱子换甲醇再冲洗试试
好的,我试一下!谢谢
液相色谱柱修复
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Ins_15dbe0d9
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原文由 液相色谱柱修复(Ins_9070be6a) 发表:柱头出现物理性损伤。反过来估计还能再用用
是反冲冲洗一下吗,我们实验室还没有反冲过柱子,不太敢??
dadgoh
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原文由 Ins_15dbe0d9(Ins_15dbe0d9) 发表:是反冲冲洗一下吗,我们实验室还没有反冲过柱子,不太敢??
他说的是反着使用,不是反冲。
若是单纯定性,还可以继续使用。若确实影像分析,只能反着试试了。
反用柱子柱效一般都不理想。
sdzb1982
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不要使用纯水冲柱子,填料会塌陷萎缩的,影响柱效,用90%的水冲柱子1h就足够冲干净缓冲盐,然后再用纯甲醇冲柱子就可以。



你可以先不接柱子,用两通代替,走流动相采集基线看看,如果很平稳,说明是你柱子污染了,需要好好冲洗。
如果还是基线这么乱,可能就是你管路系统污染了(包括流通池)
Ins_15dbe0d9
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原文由 sdzb1982(sepu007) 发表:不要使用纯水冲柱子,填料会塌陷萎缩的,影响柱效,用90%的水冲柱子1h就足够冲干净缓冲盐,然后再用纯甲醇冲柱子就可以。你可以先不接柱子,用两通代替,走流动相采集基线看看,如果很平稳,说明是你柱子污染了,需要好好冲洗。如果还是基线这么乱,可能就是你管路系统污染了(包括流通池)
接着两通用热水,纯水冲过,刚开始会有峰然后就缓慢平稳了。昨天我用甲醇冲了1个多小时柱子,然后跑了个标品,如图
待会儿打算乙腈-甲醇-异丙醇-甲醇,这样低流速洗一下试试,不知道行不行
Ins_15dbe0d9
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原文由 dadgoh(dadgoh) 发表:他说的是反着使用,不是反冲。若是单纯定性,还可以继续使用。若确实影像分析,只能反着试试了。反用柱子柱效一般都不理想。
那我不尝试了TAT
液相色谱柱修复
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这种图是典型的色谱柱的柱头塌陷图。反过来用也是没办法的办法,在继续冲洗意义不大。可以考虑修复一下柱头

原文由 Ins_15dbe0d9(Ins_15dbe0d9) 发表:
接着两通用热水,纯水冲过,刚开始会有峰然后就缓慢平稳了。昨天我用甲醇冲了1个多小时柱子,然后跑了个标品,如图
待会儿打算乙腈-甲醇-异丙醇-甲醇,这样低流速洗一下试试,不知道行不行
sdzb1982
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原文由 Ins_15dbe0d9(Ins_15dbe0d9) 发表:
接着两通用热水,纯水冲过,刚开始会有峰然后就缓慢平稳了。昨天我用甲醇冲了1个多小时柱子,然后跑了个标品,如图
待会儿打算乙腈-甲醇-异丙醇-甲醇,这样低流速洗一下试试,不知道行不行
从图上看你基线情况已经好多了,只是峰有肩缝的情况,可能柱头有塌陷了,拆下柱头,去掉头部污染填料3mm左右,寻找同型号报废色谱柱的填料(从出口端取填料),用甲醇润湿,放在光滑玻璃板上,用力压入湿润的填料,将塌陷部位补齐平整,对于一般柱头可用15%硝酸进行超声清洗5分钟,再多用纯水超声就行,然后拧上柱头,稍微反冲一会,再正接,使用就行了。
不过这也要看你柱子柱头是什么结构的,有的拆下柱头能看到填料,这种很好修复,有一种是筛板套在柱头上的,这个想取得耐点心,小心往下取。
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2024/5/30 13:28:02 Last edit by sepu007
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