首先,对于复杂化合物,如分子量特别大的多糖,在样品制备时要注意样品的溶解度,有时分子量过大的多糖溶解度不好,在H谱和C谱中有些样品的特征信号峰未呈现出来(分子量大的有的弛豫也很快,在一维二维中的信号有差异),再加上C谱的灵敏度要比H谱低,所以这类物质在样品制备时要提高样品浓度,可以考虑超声助溶等方法,效果特别不好的可以考虑水解后再检测;
其次,在信号归属中,大分子量的化合物很多的峰会出现重叠现象,堆积在3.0~4.0之间(H)、60~80(C),峰重叠的现象很严重,这时我们要提高样品的纯度,尽量降低其他杂质化合物对样品测试的干扰,同时考虑提高样品的浓度;
结合二维核磁,我们可以分析出多糖的单糖残基顺序、单糖残基在糖苷键中的位置、环状结构的类型和糖苷键的构型等信息,具体分析一定要结合样品相关文献进行,通常情况如下:
1、COSY:可以从容易辨认的质子(异头质子、甲基质子)开始,寻找糖上其他碳位的质子,归属每个质子信号;
2、HSQC:可找出易头碳质子相连的C信号及糖基上每个质子连接的C信号,通常可结合甲基化分析和其他二维谱;
3、HMBC:可联系2~4个共价键的H核和C核,可以以列表的形式写下关联的位点,从结构简单或有特色的峰开始,一一对应,实际处理时,并不是每个H都可以找到旁边所对应的C,所以要结合样品相关的文献进行分析。