主题：【第六届原创】分享一下通过饮料中甜蜜素能力验证之后的心得和总结！

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发表于：2011/09/07 22:16:36 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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甜蜜素的检测方法坛内已经有好多版友讨论过了，色谱条件的差别，好多问题都不是太清晰。
下面就我们用的色谱柱和仪器条件，在检测过程中发现的问题更大家分享一下！这也是在一次饮料中的甜蜜素检测能力验证过程中发现的问题。对过程中发现的问题做一下总结。

当拿到比对样品的时候，就开始犯愁，因为平时在做食品中的甜蜜素的时候就遇到过很大问题。对测定结果有很多不确定因素。有太多的因素会直接影响到测定结果的准确性，仔细分析了一下原因，也逐一找到了合适的结果方法，最终验证结果达到满意，这也算是对自己的努力的一种回报吧。同时也借此机会做一下总结，对今后的检测工作也有一定的指导作用。
下面就详细的做一下总结，供大家参考，也期待大家及时提出你们的宝贵意见！

食品中甜蜜素的检测方法一般都是按照GB/T5009.97-2003做的，做过的版友应该比较熟悉方法中具体的步骤，在此就不在赘述了！方法的原理大体上就是环己基氨基磺酸钠与亚硝酸钠生成环己醇，在硫酸介质中进一步生成环己醇亚硝酸酯，通过测定环己醇亚硝酸酯来进行定量。由于环己醇亚硝酸酯易挥发，因此以它来定量测定甜蜜素会影响其准确度及再现性。实验发现，衍生物环己醇亚硝酸酯的生成随温度、酸度、试剂加入顺序等实验条件的改变而改变，从而影响甜蜜素测定的准确度。所以大家在测定过程中要严格按照国家标准中步骤进行分析测定！

通过分析标准，并结合自己在平时工作中遇到的问题，总结出以下点：
第一，是要先置于冰浴，再加溶液！
第二，试剂的加入
第三，放在冰浴衍生的时间
第四，萃取振摇的次数
第五，数据处理

下面将这几点分别详细说明一下！
第一，先放在冰浴中，再加溶液
溶液温度是随放置的时间改变的，在这样一个变化的过程中，选择什么时机加呢？
温度对其反应的影响是比较大的，所以这一点需要很好的解决
虽然没有具体做过这方面的考究，从理论上分析，就可能存在问题。

通过实验证明，如果不提前在冰水浴中放一会儿，尤其是在夏天温度比较高的情况下，在加入亚硝酸钠溶液和硫酸溶液后，会有棕红色氮氧化物产生，弥漫在闭塞管内空气中，这应该是亚硝酸钠和硫酸之间的反应。然而提前在冰浴中放置一会之后，再加两种溶液，则不会出现这样的现象，从整个反应机理上来看，这一步还是很有必要严格按照要求去做的。从氮氧化物的毒性方面考虑，也应该正确去做。

第二，加试剂的顺序，这个应该按照标准要求去做，先加亚硝酸钠溶液，在加完亚硝酸钠之后需要先摇匀，否则可能影响局部反应正常进行！衍生反应一般对反应条件比较敏感，所以应该尽量避免出现局面试剂浓度过高的情况，加试剂时也应该边摇边加。这也充分体现了酸度的衍生反应的巨大影响。

第三个，放在冰浴的时间，包括从样品处理开始到进样针将样品溶液注入色谱仪进样口这段时间，其实反应是一直在进行的，时间的控制真的非常重要。具体时间的重要性，会在第五条中重点分析，敬请关注！

第四个，振摇的次数，为什么明确写明是80次？
振摇的程度也需要一致吧
振摇其实就是一个萃取的过程，振摇的次数和剧烈程度，都会影响到萃取效率吧
如何去保证每个样品具有相同的萃取率呢？这也是我们要考虑的因素！

所以保持振动的程度一致，尽量是萃取效率保持一致，这一点也是非常有必要的！

第五，色谱峰数据处理

平时检测过程中，大家色谱柱的选择应该都比较灵活，现在毛细管柱应该是大家比较常用的吧。我们选择的是hp-innowax柱子，检测过程中很明显前后有两个峰。我想这个问题大家应该不陌生吧，只是可能大家使用的色谱柱不一样，那个峰明显与否有所区别吧。

大家先看一下下面几张色谱图！

图一

图一中是连续进的两针标准品，图二和图三是前后两个峰的特写，大家不难看出，其实这两个峰值是在变化的，前面的大峰应该就是环己醇亚硝酸酯，第二针的时候峰面积减小了，后面的峰应该是环己醇吧，第二针峰面积增大了。经过多次验证都得到这样的结果，充分说明测定过程中极具不稳定性，如果测定样品更是会存在更大的变数。这样一来对能力验证过程来说确实是一个考验！连续这样一针针做下去，都会是这样一种趋势。接下来就是解决这个问题的几个方案了。

方案一：既然意识到了这个趋势，那这种趋势的源头，或者说是极端应该是后面的峰绝对为零，那只有把时间尽量向前赶，每次其处理都严格把握每一分钟，把时间精确到秒，不浪费每一分钟，处理完立即上机进样，结果还是没有用，再怎么控制也是存在后面的峰，尽管很小，甚至只有十几的峰面积，还是无法彻底除掉，看来这个方案是不行了！放弃方案一。

方案二：这样一来对时间的把握就是一个很大的难题，到底该如何控制时间才算恰到好处呢？这个问题曾困扰过我好长时间，曾经考虑严格控制衍生时间，以及衍生结束萃取，离心，直到进样的这些步骤的时间。保持每个标准品和样品都在相同的时间下重复每一针检测，尽量保持一致。尽管做的非常细致还是无法达到绝对的一致，加之标准溶液与样品基质的不同，同样会有一定的影响。不同基质下，不同浓度是否差异会更大？这些都需要进一步去验证！这些因素暂时未作深入研究，不能擅自下结论。这个方案似乎也不是最佳的解决方法。

方案三：大家都知道甜蜜素是有两个峰，不管中间处理的多么细心，时间控制的多么精密，到检测出峰的时候，后面或多或少都会有一个小峰，只是随着时间的推移，大峰逐渐变小，小峰会慢慢变大！偶然的机会发现了下面的规律，在对同一个标液在不同的时间测定的结果显示如下表：

用折线图表示似乎更加清晰，有规律！

从折线图中能够明显看出两个峰的峰面积的变化趋势，而峰面积之和的变化却相对较小。

两个峰面积变化的原因是环己醇亚硝酸酯转化为环己醇造成的，如果用两个峰面积之和进行定量或许比较合适。

下面的色谱图的对比也比较清晰！

小结
甜蜜素的检测过程一直困扰着我们，多变的因素对测定结果的影响太大，能力验证就是要求把结果作准，如何把数据测准是最终的目的，虽说用两个峰面积进行定量并没有可靠的依据，并且环己醇亚硝酸酯与环己醇之间的相对校正因子未作详细的研究，这也是今后值得进行细致研究的问题，但从目前对数据的分析来看，这种方法还是比较合适的，即使存在一定的误差，相比原来单峰校准，误差是比较小的！

相信好多版友之前已经发现这个问题，在此做一下简单分析，供大家参考，有什么不妥之处还望大家多多指正，谢谢！

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