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主题：【求助】反相柱提高水相比例为啥保留时间反而提前了呢

浏览0 回复12 电梯直达
langtao9948
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发表于：2011/09/07 21:55:58 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
今天碰到一个很奇怪的事情，做猪肉中5种磺胺残留，方法参考的是无公害猪肉的附录E，C18的250mm柱，流动相比例是甲醇：乙腈：水：乙酸=2：2：9：0.2（实际体积比），结果发现有两个5分钟内出的峰分离度不好，于是增加了一个梯度，原有流动相：水=90：10，按道理是应该分离度提高，保留时间增加，但是实际情况是却是正好相反，把水相提高到20%，结果保留时间更加进一步减低，分离度进一步减小，为什么呢，期待高手解答，是不是因为有乙酸的缘故？
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2011/9/7 23:00:35 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
乙酸可延缓出峰时间，但是反相分离我们一般讲的都是有机相占的比例，随着有机相的增加，保留时间变短，我想跟你的实验结果是相对应的。
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秦时明月
yelev1
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2011/9/7 23:04:46 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
磺胺类呈碱性吧，增加了水的比例，等于增大了流动相的PH值，样品更容易被流动相洗脱，所以保留时间减小了。
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有水有渝
xky0230699
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2011/9/8 8:00:29 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
楼主你的色谱柱没有拿错吧，2%的水对PH的影响很小，完全在方法的耐用性范围之内。
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阿怪
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2011/9/8 14:33:45 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 yelev1(yelev1) 发表:
磺胺类呈碱性吧，增加了水的比例，等于增大了流动相的PH值，样品更容易被流动相洗脱，所以保留时间减小了。

碱性物质如果增加流动相的pH应该是增加它的保留能力啊
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阿怪
zz831024
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2011/9/8 14:38:47 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
是不是可能增加了水相比例后，增加了乙酸的电离（因为我看你的乙酸比例有1.5%），故而增加了磺胺的电离，或者更好的屏蔽了硅醇基对磺胺的离子吸附作用？
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langtao9948
langtao9948
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2011/9/8 23:24:11 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
多谢大家的意见。大家多帮我想想原因，等忙完中秋节，我回头做个方案走一下试试，看看倒底是什么原因
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langtao9948
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2011/9/8 23:25:00 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:
楼主你的色谱柱没有拿错吧，2%的水对PH的影响很小，完全在方法的耐用性范围之内。


可能是我没有说明清楚，这个流动相水占很大比重啊。。。。
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langtao9948
langtao9948
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2011/9/8 23:26:53 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 耐士化工(SH102364) 发表:
乙酸可延缓出峰时间，但是反相分离我们一般讲的都是有机相占的比例，随着有机相的增加，保留时间变短，我想跟你的实验结果是相对应的。

您分析得没错，但我的试验是有机相减少了，保留时间变短。。。。
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langtao9948
langtao9948
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2011/9/8 23:29:11 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
柱子我用的是WATERS的XBridge系列的C18的柱子
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Longer
ptwx
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2011/9/9 14:08:36 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
PH变化引起离子化发生变化，进而影响保留。规则如下：
PH≈PKa时，流动相中PH值的微小变化都会引起样品保留时间有较大的变动
大部分的氨基化合物在PH<9时，都被质子化， PH减小有利于减弱氨基化合物的保留，减小其与硅羟基的相互作用，使色谱峰变窄
碱性化合物随着PH的减小而保留减弱
酸性化合物随着PH的增大而保留减弱

另外希望楼主把流动相表示更清楚些，等度和梯度都说清楚，还有各自加酸的量。
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