主题：【讨论】大家帮忙看看我这个分子量小于10000的混合小肽检测方法有什么问题

这是我们的检测方法，但是我感觉有一些问题，请大家帮忙给分析分析，提提建议。我的检测目的是要知道样品的全部分子量分布情况。

样品是分子量在10000以下的混合小肽（大豆蛋白酶解物），分子量分布主要集中在2000-300，少量在3000-5000。样品里面有小部分的氨基酸、盐类、总糖等杂质大约占10％的比例吧，还有残留的大分子蛋白，分子量20000左右，比例比较小，1％左右。
色谱条件：waters515泵，tsk柱子（swxl-gel 2000，7.8*30），紫外检测器，gpc处理软件。
流动相：乙腈-0.1％三氟乙酸的水（45：55）
检测波长：220nm
流速：0.5ml/min
标样采用12384、6512、1423、451、189五种。混合后进样。

校正曲线中，12384校正后是17000，6512校正后是3972。其他三种小分子量的标样校正后还算可以1482、514、200左右。

我的问题如下：
1 校正曲线中两个大分子标样偏离这么大，应该不行吧，不过当初请大学里的老师来做的方法，曲线就这样，不知是什么原因。这样的曲线是否符合要求？

2 我的样品并不能全溶于水，也不能全溶于流动相，可是样品的前处理方法就是用流动相溶解后过滤进样。
但是我的目的是相知道整个样品的分子量分布情况，这种情况下得到的检测结果应该不能满足我的要求是吧？光前面就滤掉了很多东西。

3 我想优化一下色谱条件，gpc的流动相是不是必须能将样品完全溶解才行？
其实我的样品先用少量氢氧化钠溶液就可溶解，然后用水或流动相就能配成溶液。
4 现在用的是紫外检测器，应该是考虑到利用肽键的220nm紫外吸收。我们有配示差检测器，不知道为什么不用示差。
这种分子量集中在2000和300之间的混合小肽样品可不可以用多角度光散射检测器来做做？
5 我是这样计算的：5000以上，5000-3000，3000-1000，1000-300，300以下。计算各个切片的百分比例。

但是实际上，我用现在的方法作样，同一个样品，不同浓度进样时，得到的各部分切片的分子量分布比例区别比较大。按道理不应该这样啊。

还请各位多多指点迷津。这是我今年的重头任务，头都大了。