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液相色谱（LC）

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主题：【分享】色谱柱清洗与再生

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〓疯子哥〓

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发表于：2007/10/20 16:40:00 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

除非特殊说明，在所有情况下，所用溶剂的体积应该是色谱柱体积的40-60倍。
应在清洗过程开始和结束时各测一次柱效和容量因子等，比较色谱柱性能的改善，以确定清洗的效果。
确保色谱柱中没有样品和缓冲溶液，清洗前所用的溶剂应与最初清洗时所用的溶剂相溶。
应确保实验测试时所用的流动相与色谱柱中最后的溶剂相溶。
1.正相填料
用四氢呋喃冲洗。
用甲醇冲洗。
用四氢呋喃冲洗。
二氯甲烷冲洗。
用无苯正己烷冲洗。

2.反相填料
用HPLC级水冲洗，冲洗时进4等份的200μl的二甲亚砜（DMSO）。
用甲醇冲洗。
用氯仿冲洗。
用甲醇冲洗。

3.阴离子交换填料
用HPLC级水冲洗。
用甲醇冲洗。
用氯仿冲洗。

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2007/10/20 16:42:00 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

4.阳离子交换填料
用HPLC级水冲洗；在冲洗的过程中进4等份200μl的DMSO
四氢呋喃冲洗。

5.蛋白质凝胶过滤填料
去除蛋白质尺寸排阻介质中的污染物有两种清洗/再生的方法。
弱保留蛋白质
用30moL/L pH3.0磷酸盐缓冲液冲洗。
强保留蛋白质
用100%的水到100%的乙腈梯度洗脱60min。

6.多孔石墨化碳
多孔石墨碳有四种再生的方法，选用哪一种方法依赖于被分析物和所用的溶剂。
酸碱再生
适合于使用极性流动相分析离子类分析物。
将色谱柱倒装
用50ml含0.1%三氟乙酸的四氢呋喃／水(1:1)溶液1ml/min流速冲冼。
用50ml含0.1%三乙胺或氢氧化钠的四氢呋喃／水(1:1)溶液1ml/min流速冲冼。
用50ml含0.1%三氟乙酸的四氢呋喃／水(1:1)溶液1ml/min流速冲冼。
用95%甲醇水溶液冲洗重新平衡。
将色谱柱改为正向。

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2007/10/20 16:43:00 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

强有机溶剂再生
适合于水相分析极性或离子类分析物。
用50ml丙酮以1ml/min流速冲洗。
用120ml二丁醚以1ml/min流速冲洗。
用50ml丙酮以1ml/min流速冲洗。
用水冲冼至平衡。
正相再生
适合于主要使用正相流动相的多孔石墨化碳柱。
用50ml二氯甲烷以1ml/min流速冲洗。
用50ml甲醇以1ml/min流速冲洗。
用50ml水以1ml/min流速冲洗。
用50ml 0.1mol/L盐酸以1ml/min流速冲洗。
用50ml水以流速1ml/min冲洗。
用50ml甲醇以1ml/min流速冲洗。
用50ml二氯甲烷以1ml/min流速冲洗。
用流动相冲冼至平衡。

三氟乙酸的去除
适合于流动相中含有三氟乙酸的多孔石墨化碳柱。
用加热到75℃的乙腈冲洗，同时色谱柱也要保持在这一温度。

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