主题：【求助】血清中的游离氨基酸检测？

怎么好多天没人回复啊？
我对该领域不懂，能做的就是帮您顶下贴。

以前的点资料，不知道有没有您可以借鉴的地方：

“采用异硫氰酸苯酯（PITC）为柱前衍生试剂进行氨基酸衍生，二元流动相程序洗脱方法分离17种常见氨基酸，分离效果好，无需柱后反应装置，反应速度快，保留时间重现性好。
实验部分：
仪器与试剂：
Labtech LC600高效液相色谱仪；Labtech 氨基酸色谱柱（5um, 250×4.6mm）；17种氨基酸标样；乙腈（色谱纯）；水（超纯水）；醋酸钠（分析纯）；醋酸（分析纯）；三乙胺；异硫氰酸苯酯。
色谱条件：
流动相A：乙腈/B＝1/1（V：V），流动相B：50mmolNaAC缓冲溶液（PH=6.5）流速：1ml/min，进样1uL（自动进样方式），检测波长：254nm，柱温为40℃。
梯度程序：


Time
（min） Mobile phase A
（V/V） Mobile phase B
（V/V）
0 10 90
5 10 90
20 30 70
45 60 40
50 95 5
55 95 5
55:10 10 90
75 10 90


柱前衍生步骤：
1. 17种氨基酸混合标准溶液：分别称取适量天门东氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、胱氨酸于容量瓶中，以0.1N盐酸定容，得到2.5mmol/L混合标准贮备液（其中胱氨酸1.25mmol/L）。
2. 1mol/L三乙胺乙腈溶液：取三乙胺139ul，加乙腈860ul。
3. 1mol/L异硫氰酸苯酯（PITC）乙腈溶液：取12ulPITC加乙腈988ul。
4. 对照品溶液的衍生：取氨基酸溶液800ul置离心管中，加1mol/L异硫氰酸苯酯（PITC）乙腈溶液400ul，1mol/L三乙胺乙腈溶液400ul，混匀，室温放置1小时，加入正己烷1.6ml，放置10分钟，取下层溶液进样。
 
结果与讨论：
  取衍生好的氨基酸标准溶液样品，连续测定10次，因第一次进样系统未完全平衡好，保留时间有漂移，最后一次进样由于室内温度较高，考虑到样品放置时间长可能会对峰面积有影响，故舍去第一与最后一次进样，统计8次进样结果和重叠色谱图如下， 
氨基酸重复性结果（n＝8）
Amino Acid
Retention time Area
RSD% RSD%
Asp 0.31 6.97
Glu 0.25 7.19
Ser 0.15 7.08
Gly 0.12 6.59
His 0.11 6.50
Arg 0.11 6.97
Thr 0.11 6.26
Ala 0.13 7.29
Pro 0.11 6.70
Tyr 0.11 6.81
Val 0.15 6.69
Met 0.15 6.75
Cys-Cys 0.19 17.04
Lle 0.19 6.73
Leu 0.20 6.90
Phe 0.17 6.62
Lys 0.15 8.90
         
8次重复进样色谱图
 
从数据可得知保留时间有较好的重现性，最大RSD0.31%，由于进样1ul，进样量较小，所以峰面积的RSD稍大，在实际测定工作当中可以加大进样量和添加内标的方式改善。”

希望您早日解决问题……

我也在找液相色谱测游离氨基酸的方法，我看过一篇资料好像用无水乙醇然后高速冷冻离心提取游离氨基酸，然后衍生、上机

最好还是用氨基酸分析仪做，液相做标准品还可以，但是做样品就不行了，杂峰太多，尤其是血中的游离氨基酸，里面还有很多在体内结合了多种取代基得氨基酸，目前最多可以测到50多种氨基酸，这些氨基酸如果不能与目标氨基酸分离，将严重影响分析结果。

血清中的游离氨基酸含量应该很低吧，那样用液相就不好做了，我经常用液相做氨基酸，低于1%的话，出的峰很难看的，结果也不怎么准确，老是遇到这方面的投诉，郁闷死了

看你怎么处理了。

没接触过这方面,期待学习中...