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主题：【求助】我是HPLC新手:如果 UV 波长相近,HPLC 是否会出现峰的重叠?

浏览0 回复19 电梯直达
snakeskin
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发表于：2008/06/10 18:11:15 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
用HPLC分离咪唑达伦和果胶,发现咪唑达伦RO溶液UV吸收波长为218,果胶溶液UV吸收为从190-300的一条下降的曲线,咪唑达伦和果胶溶液的UV吸收也为从190-300的一条下降的曲线. 我不知道这样的溶液用HPLC是否能分离. 柱子是C18的,移动相为醋酸钠和乙晴.用该HPLC方法做咪唑达伦溶液可以获得较好的标准曲线.谢谢!
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2008/6/10 19:28:05 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
说到分离的话我觉得不是和紫外吸收有关的吧，如果用反相HPLC的话应该是极性大的物质先洗脱出来吧，如果要分离的话，最好是调节流动相中有机相的比例，不是UV吸收决定的。UV波长相同，说明有可能他们有共同的发色基团，或者说相似的基团。
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snakeskin
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2008/6/10 19:31:40 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
换言之,我是可以在柱子里跑跑试试了,是吗?
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春天的楚楚
cyh3831
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2008/6/10 20:08:14 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 snakeskin 发表:
换言之,我是可以在柱子里跑跑试试了,是吗?

你想分离最好他们的UV吸收能靠的很近，不然没法分离。假如你一个物质在218有吸收，另一个没有吸收。那么，你走液相的时候，就只出来一个峰，不吸收的不出峰，就没办法知道它含量了。

能上液相的，主要选择柱子和调节流动相中有机溶剂的比例达到分离的效果。
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zhuxiugao
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2008/6/10 21:54:20 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
好像不是很好弄，可以考虑一下，重新选择流动相
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nnsss
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2008/6/11 10:10:37 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
分离和吸收是两回事,你先做了再说
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活到九十 学到一百
wangboxzzjs
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2008/6/11 12:39:03 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
楼主果然是新手，我觉得最好先看看液谱的分离原理。
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jxlinsz
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2008/6/11 16:04:07 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这要看两种物质在相同的色谱条件下保留时间是否相同或相近,保留时间相同或相近的两个峰会重叠成一个峰或是两个分离度不够的峰.识别峰是否重叠,则利用不同的吸收波长来判别
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snakeskin
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2008/6/11 16:09:06 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
谢谢大家的回复,因为是第一次用HPLC已经是好些年前的事情了,所以很迷茫.负责仪器维护的人说是怕果胶会堵柱子,我今天想想先把果胶break down以后,再试试.
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lights7622
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2008/6/11 23:46:33 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
和波长关系不大吧，和峰的分离效果关系更大些！
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snakeskin
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2008/6/12 0:10:26 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这是今天做的，第一个峰是注射了药品和果胶的溶液后出现的，然后再单独注射果胶，没有峰出现．
请问刚注射后出现的有正有反的小峰是什么啊？　为什么果胶没有出峰呢？是不是留在柱子里了？
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