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主题：【求助】梯度洗脱时出现叉峰怎么办

浏览0 回复9 电梯直达
kyo010
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发表于：2008/07/16 17:57:26 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我采用梯度洗脱柱前衍生荧光法测定谷氨酸,第一次进样峰形正常,第二次进样发现有叉峰,各次间峰保留时间相同.我又用了等度洗脱的办法,等度洗脱时各次目标峰形都正常,请问为何?
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2008/7/16 21:37:28 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
如果等度时各次出峰都很好，那为什么还要做梯度呢？
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nnsss
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2008/7/17 12:58:33 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
溶样条件是什么,在该物质出峰前加大有机相比例
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kyo010
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2008/7/17 17:28:34 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
等度洗脱用于测glu,后来那位老师又要做GABA,查了文献,多数用的是梯度洗脱,就只有硬着头皮做了.
洗脱程序(A相MeOH,B相PH6.0,0.1M NaAc,0.5%THF):
A ∶B (35∶65) -7min-A ∶B (60∶40) -5 min-A ∶B ( 80∶20) -4 min-A ∶B ( 80 ∶20 ) -2- minA ∶B(35∶65)
梯度完之后我用B相平衡了5min.
谢谢回复.做空白梯度时未见杂峰,我觉得是叉峰,而不是分离度不够.一般来说,叉峰原因有2:1.色谱拄塌陷.2.压力不稳.第一个因素应该排除,塌陷的话应该是每次每个正常峰都会出现叉峰.我们有自动脱气机,也不会存在气泡导致的压力不稳.我最怀疑的是是否只用B相平衡(为MeOH),有文献说含量低于5%改性剂的水冲洗,会使重复性变差,是这样吗,我是否应该在梯度结束后用95%的B相平衡呢,或者还有其它的原因呢?请高手赐教.
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雪妖
czj_1027
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2008/7/17 19:05:25 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
你的柱子的C18的吧，个人认为不管什么柱子最好不要用纯水冲，你那样不伤柱子才怪呢，你梯度走完了，确定后面没有杂峰了以后，应该用你开始的流动相比例平衡10分钟左右，再进行下一针，如果平衡时间不够的话，有可能你的重现性不好。你自己都知道不能用低于5%的有机溶剂冲，还那样做。
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tanggangfeng
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2008/7/17 20:49:24 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 kyo010 发表:
我采用梯度洗脱柱前衍生荧光法测定谷氨酸,第一次进样峰形正常,第二次进样发现有叉峰,各次间峰保留时间相同.我又用了等度洗脱的办法,等度洗脱时各次目标峰形都正常,请问为何?


是不是进样量太大了，进样量小点看看
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sea1981
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2008/7/17 23:25:15 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
样品稀释时有问题吗？多加点水试试！
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goodli123
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2008/8/2 17:08:25 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
在线脱气机以及混合器有没有问题
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kyo010
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2008/8/2 18:33:16 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
换了根柱,一切又OK 了
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zhangbin920
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2008/8/20 13:07:32 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
有两种可能：1 流路系统中出现漏液
            2 柱子老化
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