九、选择小牛血清的微量细胞培养检查法
在细胞培养时,除了培养基以外,常常需要加入一定 量的动物血清,最常用的是小牛血清。
它的作用机制还不十分清楚,但至少它可以给细胞提供在它生长中所必需的各种激素,各种生长因子以及脂类、蛋白和无机物等。
由于血清批与批之间质量相差很大,有的甚至有明显的细胞毒性(原因还不清楚),因此在使用前必须先作检查,以确定其是否适用于培养的细胞。
十、葡萄糖测定法
为了保证细胞良好的生长和增值,必须及时地补充所消耗的营养,由于细胞在代谢中主要利用葡萄糖作为能源,因此葡萄糖的消耗可以作为观察细胞增长和调节营养补充速度的指标,是细胞培养中必须掌握的一个重要参数。
采用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶(GOD-POD)比色法中Trider法,又称4-氨基安替比林偶联酚法(4-AA酚法)。
1.原理
利用GOD氧化葡萄糖时产生的H2O2,在POD存在时把还原型生色原氧化为氧化型生色原,其产量与血糖浓度成正比。其反应式略去
2.试剂
采用解放军302医院葡萄糖酶法试剂诊断盒,其中含葡萄糖试剂,葡萄糖酶试剂,葡萄糖标准液(100mg/dl)。
3.操作方法
取25ml蒸馏水将葡萄糖试剂溶解,加葡萄糖酶试剂0.5ml,轻轻混匀即为工作试剂。
按上述所列程序分别加入葡萄糖标准液、样品和工作试剂。37℃恒温水浴10min。用WFZ800-D3A紫外/可见分光光度计,波长500nm比色,读取吸光度。
样品管吸光度/标准管吸光度×100(标准液浓度)=样品中葡萄糖(mg/dl)
注意事项
(1)原酶及用剩的酶试剂放-4℃~-18℃冰箱保存,不能冻结。葡萄糖试剂用棕色瓶避光常温保存。
(2)工作试剂要现用现配,以防时间过久变性。
(3)加样要准确,最好用微量加样器。