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鸡蛋中三聚氰胺检测

将鸡蛋清和鸡蛋黄用搅拌器混匀，取1.0g，加入10mL具塞玻璃试管中，加入6mL 1%三氯乙酸，超声提取10min；再加入2mL 60g/L 磺基水杨酸，涡旋混匀，加乙腈定容至10mL。取样品，10000rpm，离心10min；上清液0.45μm 油系滤膜过滤。（注：该前处理方法适用于全蛋的测定。）

【仪器与试剂】
UV1201紫外-可见检测器；P1201高压恒流泵；ZWII型色谱柱温箱；三聚氰胺标准品(>99%)；三氯乙酸(分析纯)、磺基水杨酸(分析纯)、辛烷磺酸钠(色谱纯)；氢氧化钠、柠檬酸(分析纯)、乙腈(色谱纯)、超纯水(二次过滤)。

【分析方法】
色谱柱：Elite MSP C18 5μm(ID4.6mm×250mm)
流动相：乙腈/缓冲盐=15/85(缓冲盐——含10mM辛烷磺酸钠和10mM柠檬酸，调pH值至3.0)
流速：1.5mL/min
波长：240nm
温度：40℃
进样量：20μL

【实验结果】
1.      标准品谱图
1mg/L的三聚氰胺标准品的实验谱图如下：


图1 1mg/L标准溶液谱图

2.      重现性
采用此方法分析三聚氰胺，连续进样重现性良好。

图2 5mg/L标准溶液连续进样11次重现性




表1 5mg/L标准溶液连续进样11次重现性数据
编号 保留时间/min 峰面积/mV·sec
1 6.343 227.62
2 6.348. 228.53
3 6.34 228.58
4 6.349 227.73
5 6.351 227.32
6 6.348 227.75
7 6.338 228.36
8 6.333 228.44
9 6.337 228.86
10 6.34 229.4
11 6.342 229.24
平均值 6.34 228.35
RSD% 0.09 0.3


3.      标准曲线
配置浓度分别为0.05、0.2、1.0、5.0、10.0、15.0、20.0μg/mL的三聚氰胺标准溶液。将以上标准溶液在下述色谱条件下按浓度由低至高进样：

图3实验的校准曲线



4.      加标回收率
在鲜鸡蛋样品中分别加标1.0mg/kg、2.0mg/kg、4.0mg/kg、6.0mg/kg、8.0mg/kg，测试其回收率均在97%以上。

图4 阴性全蛋样品的加标谱图

表2 阴性全蛋样品的加标回收率结果
加标量(mg/kg) 计算结果(mg/kg) 回收率%
1.0 1.02 102%
2.0 1.98 99.00%
4.0 3.91 97.80%
6.0 5.84 97.30%
8.0 7.98 99.80%


5.      检测限、定量限
依据噪声值，按3倍信噪比，计算其理论检出限，按10倍信噪比，计算其理论定量限如下：

检出限（mg/kg） 定量限（mg/kg）
0.033 0.11


6.      实际样品定性和定量结果
按照此方法分析三聚氰胺，三个平行样品测试稳定性良好。

图5 三个平行鸡蛋样品谱图叠加

表3 三个平行样品分析结果对比
编号 样品一 样品二 样品三 样品四 RSD%
结果 1.98mg/kg 1.97mg/kg 2.00mg/kg 1.98mg/kg 0.6




附：鸡蛋中三聚氰胺检测全套配置清单
测试用分析方法包
序号 名称 规格级别 数量 产地
1 柠檬酸 分析纯 50g 国产
2 辛烷磺酸钠 色谱纯 60g 国产
3 三聚氰胺标准品 纯度≥99.0% 1克 美国
4 一次性注射器(200支/包) 2mL 1包 国产
5 水系滤膜(100片/盒) φ50mm，0.45μm 1盒 上海
6 有机系滤膜(100片/盒) φ50mm，0.45μm 1盒 上海
7 针筒式有机相过滤器(100支/包) φ13mm，0.45μm 2包 天津
8 Elite MSP C18三聚氰胺专用柱 ID:4.6×250mm，5μm 1支


测试用前处理配置包
序号 名称 规格级别 数量 产地
1 超声波水浴 AS3120型，3L,功率：120W 1台 天津
2 隔膜真空泵 GM型 1台 天津
3 溶剂过滤器 1000mL 1套 天津
4 分析天平 AL104，感量0.0001g 1台 进口
JD60-4,0.0001g 1台 沈阳
5 离心机 TG16G，16000转，6×50mL 1台 湖南
TD5G，5000转，12×10mL 1台 湖南
6 PH计 FE20K酸度计 1台 进口
6010酸度计 1台 上海
7 涡旋混合器 QL-861 1台 江苏




液相色谱仪标准配置包
序号 名称 数量
1 P1201三聚氰胺测试用液相色谱系统 1套 
⑴P1201高压恒流输液泵 1台
⑵UV1201紫外可变波长检测器 1台
⑶ZWII型色谱柱恒温箱 1套
⑷Rheodyne 7725i 高压六通进样阀 1支
⑸Elite MSP C18三聚氰胺专用柱 1支
⑹25µL微量进样器 1支
⑺100µL微量进样器 1支
⑻ZJ-1阀及色谱柱安装支架 1套
⑼EC2006色谱数据处理系统软件V1.0版 1套
⑽专用工具包 1套
2 高级配置(更多功能，人性化配置，工作效率更高)
⑴P1201S柱塞清洗单元 1套
⑵P1201溶剂管理器(含进口二元脱气机) 1套
⑶AS230固定体积型自动进样器 1套


备注：如需分析鸡蛋中的三聚氰胺，以上三个配置包所列仪器、试剂，都需配备，缺一不可。