紫外可见分光光度计(UV)

主题:【求助】用分光光度计,到底是用蒸馏水调零还是用空白调?

浏览0 回复33 电梯直达
wuxiaoluo
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待测样品添加试剂后(加显色试剂显色前)带颜色的,而且颜色在测定波长有吸收的,而且颜色随着样品浓度不同而略有改变的,就应该用不加显色液来作参比。如果显色液有颜色的,样品稀释颜色几乎空白,就以被测试剂空白作参比。
参比的目的是消除每次不同浓度待测组分导致的非显色的颜色吸收。让每次的显色都是以络合显色的颜色为正比。
注:如果待测组分不显色前没有颜色,就不需要参比了,水或空气都行。
参比的目的,是消除每次测定因为组分浓度不同,带来的副吸收效应的误差。
longbeixi
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测定每个样品都是不同的,要看标准是怎么规定的啊!
比如测蛋白含量(双缩脲法)就是用双缩脲试剂和生理盐水的混合液调零的!
hrcren
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如果你的空白溶液有吸收值,当然是用空白溶液调零了
颠三倒四
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我的一直是在不加溶液情况下调零的,空白什么的再通过样品的吸光度扣除空白的吸光度的
tutm
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原文由 sxysky 发表:
原文由 yanr70 发表:
我和我的同事一直都是用蒸馏水(或者超纯水)调零的,可刚才看了本版的一些帖子,大家都说应该用空白(蒸馏水+试剂)调零,有什么根据么?
1 应以溶剂调节仪器零点
 要制作校准曲线,必须先测定标准系列中不同浓度标准液的仪器响应信号值(如吸光度等)。这里首先遇到的是对“零管”响应值的处理。所谓“零管”,是指标准系列中未加被测物质的那一管。有的方法中规定用“零管”对仪器调零,本文认为这是不妥当的,应以溶剂调零。这是因为标准系列中除了被测物质的响应值与其含量之间关系呈现一定的规律外,还存在着除被测物质以外各种因素综合产生的背景响应信号值。零管响应值所反映的就是这样一种背景信号值。在以后各管的测定中,仪器所产生的响应信号值是被测物质响应值与溶液背景响应值两者的叠加。
 需要指出的是这个背景响应值在标准系列各管中不是一个恒定的值,往往随着标准系列中各管组成的不同而变异,表现为背景响应值在标准系列中随着被测物质浓度增大而减小,或背景响应值在标准系列中随着被测物质浓度的增大而增大。因此,不能简单地以零管响应值作为背景信号值从标准系列各测定值中扣除,即不能以零管对仪器调零。
 从理论上讲,只有在背景响应值不随标准系列中各管浓度的变化而改变的情况下,可以将零管响应值从各管测定值中扣除,这种理想的情况很少碰到。然而,溶剂对响应值的贡献是一个固定值。因此,应该以溶剂对仪器调零。
2 校准曲线应该包括“零管”响应值
 从上述分析中可知,零管响应信号值是反映标准系列中除被测物质外各种因素综合作用的背景响应值。它指示着当被测物质含量为零时,校准曲线在纵坐标上的位置。因此,在制作曲线或进行回归时,理应包括这一点。除个别特殊情况外,如在浓度半对数对响应信号值的关系曲线中,由于“0”没有对数,故可不包括这一点

你的深入分析很有道理。但是,你说的我还有点疑问。

1. 你说的观点是不是与数据处理方法有关?如果,使用零管调零,不使标准曲线强制过零点。这样的标准曲线是不是已经包含的你所说的影响呢?

2. 如果不能用零管调零,是不是差示光度法的使用也会有问题?因为这个方法不但可能使用零号管调零,甚至可能使用1、2、3号管调零的。
zhouxiaoyun930
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这要看看你的溶剂在这个波长下有没有吸收  若没有  则可以用蒸馏水  若有就要用试剂空白做参比
zlf99056
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关键是看你做曲线时用的空白还是蒸馏水,分析样品时要与做曲线一至
eee9999eee
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原文由 zhouxiaoyun930 发表:
这要看看你的溶剂在这个波长下有没有吸收  若没有  则可以用蒸馏水  若有就要用试剂空白做参比

同意你的观点!!!
tutm
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原文由 eee9999eee 发表:
原文由 zhouxiaoyun930 发表:
这要看看你的溶剂在这个波长下有没有吸收  若没有  则可以用蒸馏水  若有就要用试剂空白做参比

同意你的观点!!!

那要知道“溶剂在这个波长下有没有吸收”岂不更麻烦,而且更不好掌握?
0.001可以不算吸收,那0.003或0.005算不算呢?可能还不如以空白溶液做参比更方便呢?
mon1126
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