主题：【讨论】进了几针样，峰就几乎没了是怎么回事

原文由 realtiger 发表:
进的是标样1ppm 乙腈溶液；换柱子后进样量由20改为10ul

原文由 03yx2 发表:
从总体来看，峰的分离不好。所以条件尚待改善。

1、比较第一和第二的图谱，有两个差异，一个是峰高，一个是峰的种类。

不知道你第二天进针是不是进了2倍的体积，峰面积较高。从而含量比较小的物质成分也在图谱中表现出来了。这样峰比第一个就多了不少。如果进样量是一致的话，那就应该是柱子残留，即冲柱子的时间不够，建议不要倿嗇冲柱子的时间。一般用5%-10%的甲醇冲40min，再用有机相冲洗一个小时。如果残留比较严重可以小流速的再长时间冲洗下。

并没有进两倍体积，第一张图只是没有把后面的三个非目标物显示出来，现在我重新换了一张

2、换了一根柱子之后，第一针的图谱是比较标准的。分离度相比另一根柱子第一针稍微好了些。但是第二次的进样图谱完全变形了。但是看到你的峰高，好像进样量是前一针的一半，当你进样量减小，峰高必然降低，又由于你是梯度，存在漂移，这些原因就会使图谱很难看。建议在针与针之间增加柱子的平衡时间。等到柱子残留很低，再进第二针。

应该是换了柱子后比第一张要差啊

3、至于提高分离度。由于不能看到你的保留时间，只能大概的，建议初始有机相比例提高，在10-16分钟走一个等度，等你要的峰全部出来，再加大有机相知道纯有机相冲洗和平衡。

原文由 doxw0323 发表:
楼主说的还不详细，zorbax只是一个牌子，C18是个型号，具体是什么的柱子，是否适合做酸性比较大的物质分离，还要看柱子。
看图谱，基线有向上走的趋势，不是很稳。254nm，波长用的很普遍，不存在流动相干扰的问题。第一天和第二天相差都比较大了，柱校下降太快，真要考虑是否流动相的酸度不适合。

原文由 03yx2 发表:
从总体来看，峰的分离不好。所以条件尚待改善。

1、比较第一和第二的图谱，有两个差异，一个是峰高，一个是峰的种类。

不知道你第二天进针是不是进了2倍的体积，峰面积较高。从而含量比较小的物质成分也在图谱中表现出来了。这样峰比第一个就多了不少。如果进样量是一致的话，那就应该是柱子残留，即冲柱子的时间不够，建议不要倿嗇冲柱子的时间。一般用5%-10%的甲醇冲40min，再用有机相冲洗一个小时。如果残留比较严重可以小流速的再长时间冲洗下。

2、换了一根柱子之后，第一针的图谱是比较标准的。分离度相比另一根柱子第一针稍微好了些。但是第二次的进样图谱完全变形了。但是看到你的峰高，好像进样量是前一针的一半，当你进样量减小，峰高必然降低，又由于你是梯度，存在漂移，这些原因就会使图谱很难看。建议在针与针之间增加柱子的平衡时间。等到柱子残留很低，再进第二针。

3、至于提高分离度。由于不能看到你的保留时间，只能大概的，建议初始有机相比例提高，在10-16分钟走一个等度，等你要的峰全部出来，再加大有机相知道纯有机相冲洗和平衡。[/quo



表示同意！说的很好！

原文由 realtiger 发表:

原文由 03yx2 发表:
从总体来看，峰的分离不好。所以条件尚待改善。

1、比较第一和第二的图谱，有两个差异，一个是峰高，一个是峰的种类。

不知道你第二天进针是不是进了2倍的体积，峰面积较高。从而含量比较小的物质成分也在图谱中表现出来了。这样峰比第一个就多了不少。如果进样量是一致的话，那就应该是柱子残留，即冲柱子的时间不够，建议不要倿嗇冲柱子的时间。一般用5%-10%的甲醇冲40min，再用有机相冲洗一个小时。如果残留比较严重可以小流速的再长时间冲洗下。

并没有进两倍体积，第一张图只是没有把后面的三个非目标物显示出来，现在我重新换了一张

2、换了一根柱子之后，第一针的图谱是比较标准的。分离度相比另一根柱子第一针稍微好了些。但是第二次的进样图谱完全变形了。但是看到你的峰高，好像进样量是前一针的一半，当你进样量减小，峰高必然降低，又由于你是梯度，存在漂移，这些原因就会使图谱很难看。建议在针与针之间增加柱子的平衡时间。等到柱子残留很低，再进第二针。

应该是换了柱子后比第一张要差啊

3、至于提高分离度。由于不能看到你的保留时间，只能大概的，建议初始有机相比例提高，在10-16分钟走一个等度，等你要的峰全部出来，再加大有机相知道纯有机相冲洗和平衡。

初始有机相比例再提高的话应该不利于分离啊