主题：【求助】关于进样口定量环（HPLC）

原文由 notrofang 发表:

原文由 suiyou2011 发表:
各位，向你们请教一个问题。
是这样的，我们这里的Waters的仪器比较老，手动进样，进样口有一个20ul的定量环，我每次都用的是25ul的进样针进样，差不多注入30 ul的样品，但最近却突然听说，要进定量环4倍的体积才能定量。
对此，我非常不解，还请各位指教。
谢谢了！

进多点当然好拉,样品环润洗就用掉差不多40ul了.

原文由 fengxuemei 发表:
我们用的也是20ul的定量环，进样是用1ml的一次性注射器，配针头过滤器。每次做样结束，冲柱子时，一般把手柄置于inject状态，这样边冲柱子边清洗进样环路，不知是否可取？进样口是否需要单独再清洗？

原文由 suiyou2011 发表:
这么说，之前测定的都不准了
那这样测得的标准曲线就需要重新测定了对吧？
对于为善么要这样测定，我还不是很明白，既然已经有定量环了，为什么还要多进呢？

原文由 suiyou2011 发表:
各位，向你们请教一个问题。
是这样的，我们这里的Waters的仪器比较老，手动进样，进样口有一个20ul的定量环，我每次都用的是25ul的进样针进样，差不多注入30 ul的样品，但最近却突然听说，要进定量环4倍的体积才能定量。
对此，我非常不解，还请各位指教。
谢谢了！

原文由 xydell 发表:

原文由 suiyou2011 发表:
各位，向你们请教一个问题。
是这样的，我们这里的Waters的仪器比较老，手动进样，进样口有一个20ul的定量环，我每次都用的是25ul的进样针进样，差不多注入30 ul的样品，但最近却突然听说，要进定量环4倍的体积才能定量。
对此，我非常不解，还请各位指教。
谢谢了！

请问楼主以前进30ul的样品时，有没有发现重现性异常的情况？如果没有，我想也不一定要进4倍体积的，要是每次进样这么多，那得要多少样品呀。

原文由 qwqin 发表:
采用半环进样，20ul的定量环，用10ul的进样针

原文由 maggiebird 发表:

原文由 suiyou2011 发表:
这么说，之前测定的都不准了
那这样测得的标准曲线就需要重新测定了对吧？
对于为善么要这样测定，我还不是很明白，既然已经有定量环了，为什么还要多进呢？

这是因为流体的流动在定量环的管内形成了层流现象，所以，20uL的定量环当你进样在10uL和40uL之间，实际上你的样品已经部分跑进了废液瓶，就不准了。

所以正确的进样体积是：
  1.半环定量
    进样体积不能大于定量环总体积的一半；
    例如： 20 µL 定量环的最大进样量为10 µL

  2.满环定量
    进样体积至少为定量环总体积的2-5倍；
  例如： 20 µL 定量环的进样量是40-100 µL