(5) IMDM细胞培养基
IMDM是由Iscove's改良的Eagle培养基,增加了几种氨基酸和胱氨酸量。可用于杂交瘤细胞培养,以及无血清培养的基础培养基。
(6) RPMI-1640细胞培养基
Moore等人于1967年在Roswell Park Memorial Institute研制,针对淋巴细胞培养设计,BSS+21种氨基酸+维生素11种等,广泛适于许多种正常细胞和肿瘤细胞,也用做悬浮细胞培养。
(7) Fischer’s细胞培养基
用于白血病微粒细胞培养。
(8) HamF10、F12细胞培养基
1963年、1969年由Ham设计,含微量元素,可在血清含量低时用,适用于克隆化培养。F10适用于仓鼠、人二倍体细胞,F12适用于CHO细胞。
(9) DMEM/F12细胞培养基
DMEM和F12细胞培养基按照1:1比例混合效果最佳,营养成分丰富,且可以使用较少血清,或作为无血清培养基的基础培养基。
2. 低血清细胞培养基
血清对于在传统培养基配方中生长和增殖的大多数细胞系来说是必不可少的。大部分的组织培养研究者非常熟悉血清添加物给予基本培养基配方的良好生长支持特征。然而,伴随血清的使用也带来了很多的问题。
费用因素
生产血清费用高而效率低。小牛血清还必须来源于没有疯牛病、口蹄疫和其它高度传染性疾病的地区。
差异
所有的血清都是一种成分不确定的混合物,血清批与批之间的组分存在差异。
传染源
动物血清有可能携带传染源,包括支原体、病毒和有毒物质。任何一种传染源可能对正在生长的细胞系或者制品带来风险。
法规问题
为了使与传染源相关的风险减少到最低,存在多个国家间进出口生物材料的国际法规。
为了解决这些问题,清大天一公司开发了多种营养培养基,以最小化和消除与使用动物血清相关的制品安全性问题。
(1) 低血清细胞培养基的原理
通常在用传统培养基培养细胞时须加入约10%的小牛血清,低血清培养基是在基础培养基中添加了额外的营养成分,使小牛血清的添加量减少50%到70%,而对于细胞生长、增殖、形态和功能有较小或者没有影响。
(2) 低血清培养基的优点
小牛血清是细胞培养液成本最大的原料,使用低血清培养基明显地节省培养液成本。
减少制品纯化损失,提高纯化收率,便于分离纯化。
减少由于不确定蛋白或者其它血清组分带来干扰和差异的风险。
提高制品安全性。
批间差减少或影响降低:
a) 血清用量减少可以减少使用批次。
b) 血清用量减少使得批间差的影响减少。
细胞在低血清培养基的生长相当或者优于加入10%小牛血清的传统培养基,没有观察到在细胞形态及增殖方面的显著差异。
(3) 低血清细胞培养基的应用
VERO细胞、BHK21细胞等细胞在转瓶、微载体反应器中的培养。
5. 无血清无动物组分细胞培养基
无血清无动物组分细胞培养基意指以该培养基配制的培养液无须添加牛血清即可培养细胞和维持生长收液,且该培养基成分中不含有任何动物来源成分。
在细胞培养生产生物制品过程中无须添加动物来源成分,避免疯牛病、口蹄疫等传播进入人体,减少人、兽在使用生物制品时的特异性免疫反应、降低产品成本(如降低培养液成本,简化下游纯化工作及提高产品收获量等)。采用生物反应器、无血清无动物来源成分培养基进行细胞培养制药是21世纪生物制药发展趋势;美国FDA和美国农业部已经严格控制在细胞培养中胎牛血清的使用。
同时,高密度细胞培养并长时间维持细胞密度是高表达率和高产量的关键,只能通过无血清悬浮培养技术来实现。
为了获得足够的营养成分,无血清无动物组分细胞培养基中氨基酸含量倍增,另外添加了生长因子和/或细胞因子,以及含有个别蛋白或大量蛋白的组分。
无血清无动物组分细胞培养基通常是特定细胞专用培养基,如无血清无动物组分CHO悬浮细胞培养基适用于CHO悬浮细胞。