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主题：【求助】我的色谱柱是不是堵住了？

浏览0 回复13 电梯直达
brant8
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发表于：2009/08/19 20:30:30 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
悬赏金额：20积分 状态： 已解决
我用的是安捷伦高效液相1100，主要在用于做血药浓度测定。
其中一根色谱柱，TC-C18，4.6*250mm，5um，用于测定血浆中甲氨蝶呤浓度。流动相用的是甲醇：磷酸缓冲盐（PH=5.41）=21：79。
之前有停了将近两个月没有做，运作也是正常的。
可是上次洗完系统后，做这根柱子时，压力由原来的140bar左右骤升至310bar左右，由于是马上出结果，所以只好硬着头皮做下去，但峰形没有变化，出峰时间稍有滞后1~2min。
系统压力绝对没有问题，做别的柱子正常。
打电话给客服，让我脱检测器，反向冲柱子，先用水冲了25ml，后用异丙醇0.5ml/min，2h，155bar，但正向冲甲醇5%、水95%、0.2ml/min时压力都非常高，而且都是以4~5bar的速度上升，可至300多bar，奇怪的是我将流速设为零后，压力还不降低，降低速度最多以1bar的速度降低，太反常了。

请问：我的柱子是不是堵了？如果是还有救吗？我在医院工作，液相水平太低，麻烦各位高手给我支支招！
推荐答案：柏坡回复于2009/08/19
判断是不是柱子的问题，你可以先拿掉柱子设流速，看压力，这个一般很低。

看你说的情况 柱子可能是堵了，低流速低有机相（5%的有机相，0.5左右的流速）先冲冲看，是否有改善，带缓冲盐的流动相一定要冲干净。处理柱子可能会花费多一些的时间。注意保养柱子。
补充答案：

pandora98回复于2009/08/20

应该是柱子堵了，可能是磷酸盐的问题，使用之前应该过滤的，现在最好是用95％的水倒着冲洗一下看看。
还有可能是样品前处理不到位，可以试试用二氯甲烷等强极性溶剂洗一下柱子，注意洗的时候流动相用异丙醇做过渡，同时注意压力。

小卢回复于2009/08/20

你用的都是高杂质的东西，血和盐。所以堵得可能很大！！！
按照1楼的说法可以试下看；然后，再继续反冲！！！

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2009/8/19 22:45:12 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
判断是不是柱子的问题，你可以先拿掉柱子设流速，看压力，这个一般很低。

看你说的情况 柱子可能是堵了，低流速低有机相（5%的有机相，0.5左右的流速）先冲冲看，是否有改善，带缓冲盐的流动相一定要冲干净。处理柱子可能会花费多一些的时间。注意保养柱子。
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isee
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2009/8/20 11:11:27 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
有可能是堵了,使用缓冲盐时,一定要过滤,切不可省去此步.
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〓猪哥哥〓
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2009/8/20 16:27:55 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
做其他的柱子压力都正常，你的那根柱子可能堵得非常厉害。
反冲的效果如果不明显的话，只能拆开色谱柱，看看是不是柱筛板堵了，如果不是把表面的填料挖去一点。但是可能会影响保留时间。
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Last edit by 03yx2
pandora98
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2009/8/20 17:05:12 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
应该是柱子堵了，可能是磷酸盐的问题，使用之前应该过滤的，现在最好是用95％的水倒着冲洗一下看看。
还有可能是样品前处理不到位，可以试试用二氯甲烷等强极性溶剂洗一下柱子，注意洗的时候流动相用异丙醇做过渡，同时注意压力。
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小卢
luxw
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2009/8/20 17:15:07 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
你用的都是高杂质的东西，血和盐。所以堵得可能很大！！！
按照1楼的说法可以试下看；然后，再继续反冲！！！
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jeanee
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2009/8/20 19:35:37 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
看下过滤白头上是不是有盐析出了
我遇到过这种情况
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2009/8/21 11:56:37 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这么高的压力，建议不要再用了，即使这次冲下来了，几天后压力就又上去了。维持在高的压力（大于300bar）下对你的系统损坏很厉害，换新的吧。
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zhouxiaoyun930
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2009/8/21 13:54:10 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料，所以堵的可能性很大，还有用的是磷酸盐缓冲，盐易吸出。  当压力太大时易损坏高压泵。
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dony2008
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2009/8/21 15:17:47 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
是不是上次用完没平衡柱子啊 得用不含缓冲盐的流动相冲一下 在保存在纯的甲醇或乙腈中  不过度的话 缓冲盐溶解度降低 容易结晶  堵塞柱子
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小余儿
ywl168
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2009/8/21 20:59:02 12楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这是缓冲盐没洗干净结晶堵了柱子。把前面的白头和柱子的筛板还掉。
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