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液相色谱（LC）

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主题：【求助】皂苷的hplc含量测定

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发表于：2009/10/05 23:53:44 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

小弟在测甾体皂苷，用的是已腈-磷酸水（酸万分之一），梯度洗脱，DAD检测。
待测样品用普通分析纯的甲醇溶解，微孔滤膜过滤，进样分析。
做了好几次，发现皂苷的峰不明显，并且更要人命的是，谱图中有很多溶剂峰，强度很大很高，现在才意识到，以前都当成皂苷的吸收峰，因为不像溶剂峰，都是末端吸收，没办法区分。
今天，在进对照品时，发现对照品进入液相后，有好几个末端吸收峰，发现问题比较严重，对照品纯度没问题的。
我怀疑：
1、普通分析甲醇溶解对照品和样品后，才导致出现谱图中不同位置出现大小不一样的溶剂峰。我马上做了空白对照，确实甲醇单独进入液相分析，有很多溶剂峰，末端吸收，真是无语。
2、考虑到溶剂问题，我又做了已腈空白对照，发现还是有溶剂峰，只不过少了很多，只有两个看起来比较高的峰。一个出峰在10分钟，一个在很靠后。

接下来，我想做下面尝试：
1、用流动相来溶解样品，就是已腈-磷酸水，同时，先做溶剂空白。
2、考虑用已腈溶解样品

紫外检测，感觉皂苷的峰不灵敏，但是比较实用，所以还是选择用紫外检测。

对以上问题，请各位朋友多多指导。十分感谢！！！

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2009/10/6 11:11:31 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

能把图谱发上来一起共享就更好了。你用的波长是多少，怎么末端吸收这么强，而且乙腈还有出峰，找到原因了吗？

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2009/10/6 17:27:57 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 xky0230699 发表:
能把图谱发上来一起共享就更好了。你用的波长是多少，怎么末端吸收这么强，而且乙腈还有出峰，找到原因了吗？

我用的波长主要是198、203和210，感觉三个波长差别不大
我做了空白试验，发现用流动相溶解样品和对照品，很多溶剂峰都消失了，不过还有2个大的溶剂峰。
然后，样品中皂苷的峰初看没有，走的是已腈-磷酸水（万分之一的酸）
放大很多倍后，才看到依稀几个小峰，是不是酸的浓度太低了？我的样品浓度5mg/mL，是工艺之后的总固物。不知道该怎么办？

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