原文由 linjie341000 发表:
在做核苷酸分离实验,流动相是离子对缓冲盐溶液(四丁基硫酸氢铵+磷酸氢二钾):甲醇=1000:40,预混后的流动相pH值为3.43。
第一次用汉邦的C18柱做,分离效果很好。第二次做重复试验时,条件完全相同,柱子也相同,结果却完全分不开了。
后来又换了根德国某品牌的C18柱做,也是第一次做效果很好,第二次做,同样的条件同样的柱子,又完全分不开了。
每次用完后,都是先用5%的甲醇冲洗1小时后,梯度升到100%甲醇再冲洗至少两小时。
请教前辈,是什么原因导致实验无法重复?用离子对试剂做流动相时有什么要注意的吗?