主题:【讨论】为何PDA扫描蛋白(BSA ,HSA)的吸收图谱在280nm处基本无吸收

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cpudaxiao
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如题,最近用BECKMAN的MDQ做了BSA和HSA的分离,发现二者在280处基本没有正吸收,而几乎所有的生化教材都告诉我们大多数蛋白在280处吸收强烈,可作为蛋白定量的检测波长.当然毛细管电泳是在柱检测的,管内径很小(几十微米,而紫外吸收池是1厘米的),不知道这是否是问题所在?
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sunpengwjh
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建议找一下最大吸收,看看偏差多大!有DAD检测器么?如果没有就用紫外课可以,可以做一下全扫描!
i_am_ling
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我们也是紫外检测器,所以每次都是先溶解样品在紫外上检测一下最大吸收波长!然后在上仪器!
cpudaxiao
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原文由 sunpengwjh(sunpengwjh) 发表:
建议找一下最大吸收,看看偏差多大!有DAD检测器么?如果没有就用紫外课可以,可以做一下全扫描!


有DAD的,扫描结果就是在220nm处有最大吸收,和经典教材的明显不一样,原因未知。
sunpengwjh
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建议找一下最大吸收,看看偏差多大!有DAD检测器么?如果没有就用紫外课可以,可以做一下全扫描!


有DAD的,扫描结果就是在220nm处有最大吸收,和经典教材的明显不一样,原因未知。

建议还是选用自己测试的结果吧,有些文章可信度也不是很高的!
cpudaxiao
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是啊,我的样品都是sigma的标品,应该没什么问题,可能和仪器的性能也有关系。
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