主题:【极限体验+原创大赛】Ultimate与其它色谱柱对阿奇霉素及其杂质的的检测效果对比

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ecco2
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(一)分析背景及色谱条件
    红霉素是一种十四元大环内酯类抗生素,一直是临床上治疗革兰氏阳性菌感染的重要药物,半个世纪以来为人类提供了一条安全高效的用药途径。经过不断研究人们相继开发出了耐酸性好的第二代红霉素和不易引起细菌耐药性的第三代红霉素。
阿奇霉素可以说是目前第二代红霉素中最具有活力的大环内酯类抗生素,其生产步骤简单,在国内外都具有很大的生产量,尤其在国内,在许多药厂都有生产。但与其它第二代大环内酯类抗生素相比阿奇霉素的HPLC分析一直是个难点,这也与其独特的十五元环结构有关系。而且我们经过试验发现不同色谱柱对其检测的结果差别很大,普通的C18柱无法保证效果,C18 BDS的色谱柱的检测结果也不是很好,我们尝试了几种不同的在C18柱基础上经过各种填料处理的色谱柱,其中包括了“极限”系列的色谱柱。

    阿奇霉素分子式

    色谱条件:磷酸氢二钾盐水溶液与乙腈以45:55混合。检测波长210纳米,柱温30°C,流速1.0ml/min,进样量50微克。
阿奇霉素样品取自上海某药厂提供的产品,其纯度在95%以上。
色谱柱我们共尝试了五根:
(1)普通C18柱,编号为1;
(2)某品牌BDS C18柱,编号为2;
(3)大连某国产色谱柱,编号3;
(4)日本某色谱柱(药检所推荐)。编号4;
(5)Ultimate XB-C18色谱柱,编号5.
(二)试验结果

(1)

(2)


(3)


(4)


(5)


        主峰时间 拖尾因子不对称度半峰宽 理论塔板数 杂质分离度
1    18.432    4.856    7.258    0.653    4409    ——
2    16.780    1.455    1.704    0.420    8844    0.452
3    18.620    1.038    1.039    0.417    11067    ——
4    28.995    1.231    1.449    0.583    13698    1.860
5    27.392    0.744    0.475    0.582    12306    1.172
(三)分析与讨论
(1)对于两种主要杂质的显示情况,1和3只能显示出一种。4对它们的分离度最好,5次之。
(2)从主峰阿奇霉素的峰型来看3最好,4,5次之。
(3)关于主峰也就是阿奇霉素的出峰时间,4,5明显晚于前三个色谱柱。关于不同厂家不同批次的阿奇霉素我们已做过很多实验,绝大多数杂质出峰都在阿奇霉素之前,而且种类很多,也就是除了本实验所测样品显示的这两种主要杂质之外还存在有很多杂质,理论上讲主峰出峰时间晚有利于前面杂质峰的分离。
    总结起来,从初步的对比检测中发现Ultimate XB-C18色谱柱对阿奇霉素杂质检测的情况还是很令人满意的,甚至不亚于药检所推荐使用的色谱柱。我们准备继续进行一系列的分析实验,对几种较难分离的杂质进行对比分析。


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chfnh
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楼主,从主峰的拖尾因子数据来看,好像图3的峰形才是最好的,但是柱效有点低,因为峰太矮,楼主怎么说主峰的峰形图5最好啊
ecco2
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谢谢楼上提醒,今天发帖写的有点快,之前写错了,确实是3最好,4和5差不多。从图上也能看出来。
zxhcnf
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zxhcnf
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如果楼主,能把样品的前处理方式贴出来就好了,因为前拖很有可能是由于没有用流动相溶解样品引起的,而后拖则有可能是封尾不是很好引起的
ecco2
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拖尾的类型不相同但程度还是差别不大的。这一系列实验流动相用的是乙腈-水,溶解样品时都是用的纯乙腈,处理方法都是一样的。
zxhcnf
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原文由 ecco2(ecco2) 发表:
拖尾的类型不相同但程度还是差别不大的。这一系列实验流动相用的是乙腈-水,溶解样品时都是用的纯乙腈,处理方法都是一样的。


建议楼主看一下这篇帖子,可能用流动相溶解样品对图5的峰形更好一些,因为乙腈做样品溶剂,而流动相为乙腈:水=55:45 时,溶解样品的溶剂比流动相洗脱能力强,容易导致前拖。http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20091030/2184029/
vanvan
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vanvan
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原文由 ecco2(ecco2) 发表:
谢谢楼上提醒,今天发帖写的有点快,之前写错了,确实是3最好,4和5差不多。从图上也能看出来。

从这来看,国产的色谱柱性能也是很好的哦,做得结果居然最好哦。
zxhcnf
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原文由 vanvan(vanvan) 发表:
原文由 ecco2(ecco2) 发表:
谢谢楼上提醒,今天发帖写的有点快,之前写错了,确实是3最好,4和5差不多。从图上也能看出来。

从这来看,国产的色谱柱性能也是很好的哦,做得结果居然最好哦。


是的,其实国产的色谱柱有很多样品也是分得很好的,关键是填料的选择性和液相条件正好合适
yongzhbenq
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进样量50微克?进样体积是多少?
磷酸氢二钾盐水溶液是多少浓度的磷酸盐缓冲溶液浓度?
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