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主题：【求助】求助：标准曲线如何制作？

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发表于：2009/12/14 18:10:31 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
要检测样本内五肽(氨基酸序列已知，如GRGDS)的浓度，我看文献上是用6mol/L(也有用12mol/L)盐酸水解后，将五肽水解成单个的氨基酸，再用柱前衍生化法用HPLC检测各氨基酸的浓度。我现在的疑问是：1 标准曲线如何制作？是选择相应的氨基酸，各氨基酸使用相同的摩尔浓度测定再描绘的吗？

2 样本中的多肽浓度的结果如何给出，是用检测得到的单个氨基酸浓度吗？理论上五肽中各个氨基酸的摩尔浓度除了甘氨酸(GRGDS中两个G)外，应该都是相同的吧？
本人非药物分析专业，对HPLC一知半解，还请各位高手解惑，多谢!
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2009/12/14 20:28:28 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
一定要水解后才能衍生吗？
1、标准曲线用相同的已知含量的氨基酸配制系列不同的浓度制成，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标建立曲线方程。
2、把样品的峰面积代入曲线方程得出浓度。
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2009/12/14 21:47:42 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 xky0230699(xky0230699) 发表:
一定要水解后才能衍生吗？
1、标准曲线用相同的已知含量的氨基酸配制系列不同的浓度制成，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标建立曲线方程。
2、把样品的峰面积代入曲线方程得出浓度。


我的样本中有固态物质，需要用有机溶剂把它溶解。至于水解多肽，是参考文献中的做法。如果不水解短肽，不知道有机溶剂(如氯仿)，会不会影响短肽的定量测定呢？
还有，如果直接用短肽做标准曲线，可以吗？

顺便再问个问题，衍生用的异硫氰酸苯酯(PITC)用哪个厂家的比较好？sigma的1ml200多，还要预订，要等一个月的时间
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有水有渝
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2009/12/15 7:59:22 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
只要短肽与五肽之间有确定的定量关系能够换算就行，异硫氰酸苯酯(PITC)这个东西以有用过，忘了是什么品牌的了，你看一下国内的比较大 的试剂公司的就行，主要是要求纯度高点。
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yfdihdx
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2009/12/15 10:07:34 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
感谢朋友回复。
我贴子里说的短肽，就是五肽。
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