请版主将本帖内容加到板凳里,谢谢!
经过了上面三步,又出现了
新的问题:
1.第二张图里,主峰前面还有一些杂峰,如果从我收集的部分来讲,是不可能收集到那的。那为什么会有呢?我猜测原因可能是这样的:我收集了大约3ml馏分,然后用吹风机一顿吹,吹成了几乎干了。(为什么不吹干?因为我怕吹跑了,哈哈)后来又把它溶到0.2ml TFA流动相中,这样事实上里面成分和浓度是有变化的,所以可能产生了一些莫名其妙的峰,因为这并不是很关键,峰值也不高,也没有太在意,如果那位战友有别的见解,请指教!
2.明明是在离子对中的一个峰,到TFA里怎么就变成两个了?这个问题可是很头疼的啊,分析其原因,可能有以下两个:第一,在离子对中的单一峰是假象,事实上就不是一种物质,而是至少两种物质,只不过离子对流动相没有分开,而到TFA流动相中就分开了(在这里不得不提一个问题,就是本底,或者说背景,这也是月旭工程师提醒我的。相对TFA,离子对可以抬高本底。也就是说有些物质虽然在离子对没有峰,但它确实存在,而是被离子对的高本底盖过去了,但是到TFA时本底一降,也就表现出来了)。第二,上面说过了,从3ml的离子对流动相浓缩成0.2ml,事实上浓缩了15倍,在这个过程中辛烷磺酸钠的浓度也极大的提高了。而辛烷磺酸钠在210nm是会有一定吸收的,所以可能有一个峰就是辛烷磺酸钠。(到这了可能有网友问我,那有没有用TFA流动相跑一个离子对流动相的样品呢?答案是有。我吸取了20微升离子对流动相,然后在TFA流动相条件下跑,结果除了一开始的杂峰之外是没有别的峰的,如下图。但是这个“空白对照”可靠吗?事实上也不可靠,因为他的浓度比较低,所以我怀疑它作为对照的可靠性。)考虑了这两个问题之后呢,我又进行了一个实验。把我的样品用TFA流动相也跑一下,看看是几个峰。(到这不知道是不是有人有点对我的样品糊涂了啊,呵呵。我做以上所有的实验都是用的同样样品,假定他是A,然后把A用离子对流动相分离,收集了目标馏分,然后浓缩,再溶于TFA流动相,现在称它为称为a。所以到现在有两个样品两种流动相)就是A用TFA流动相跑,这个在上面有图的。好了,下面让我们看看这张激动人心的图吧(下图所有样都是TFA流动相)。
从上图可以看出,我的样品(即A)在TFA流动相中相应位置是只有一个峰的,a样品是从A样品来的,但是它在相应位置有两个峰的可能性是不大的,据此推测a样品中出现的那个峰有可能是辛烷磺酸钠。另外图中还有两个“空白对照”,虽然他们没峰,但是因为浓度远远不同,所以我觉得不太可靠。这样呢,上面第二个问题有了一个比较可能的答案了,即多出的一个峰是离子对造成的。(还有从上图看出同样样品的重复性很差,不知道为什么。咨询了工程师,说可能是因为强保留物质造成的,所以就反冲了柱子,不知道能不能解决。)
接下来希望能验证一下这个想法,还想做以下实验:
1.用TFA流动相来跑一下相应浓度的辛烷磺酸钠,来个真正的空白对照。
2.用TFA分离A,然后用离子对流动相分析收集的馏分。
各位大侠网友有什么意见建议?请大家不吝赐教!