主题:【极限体验&原创大赛参赛作品】一种未知小分子抗生素HPLC分析方法的建立(实验进度更新100109)

浏览0 回复66 电梯直达
cico0907
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很厉害,对于我们这种新手是一种促进。
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vanvan
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很不错啊,这个大家投票的时候要记起来。
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土老冒豆豆
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原文由 nritw(nritw) 发表:
原文由 zxhcnf(zxhcnf) 发表:
楼主的写得非常详细,图也帖得好
经验非常有价值,特别是对初学者而言,写得太好了。
搂主所附的文章已经下载,谢谢分享!呵呵。。。

请教一下,还想加东西加不进去了,超过字数限制了,怎么把它拆分成多个楼层呢?

看来楼主还确实是新手没有经验啊。一般发大部头作品的时候,发帖者作为楼主先占用2层或者3层楼,就是为了预防要添加内容或者要继续写下去用的。
现在您的沙发被别人占据了,而您原来的帖子字数过多已经无法添加新的内容了。建议如下,要么在您的主题帖里标明,第二部分见15楼,要么让版主帮你征用下沙发那层楼,用来放您的补充内容。
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samanthalas
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原文由 土老冒豆豆(土老冒豆豆) 发表:
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楼主的写得非常详细,图也帖得好
经验非常有价值,特别是对初学者而言,写得太好了。
搂主所附的文章已经下载,谢谢分享!呵呵。。。

请教一下,还想加东西加不进去了,超过字数限制了,怎么把它拆分成多个楼层呢?

看来楼主还确实是新手没有经验啊。一般发大部头作品的时候,发帖者作为楼主先占用2层或者3层楼,就是为了预防要添加内容或者要继续写下去用的。
现在您的沙发被别人占据了,而您原来的帖子字数过多已经无法添加新的内容了。建议如下,要么在您的主题帖里标明,第二部分见15楼,要么让版主帮你征用下沙发那层楼,用来放您的补充内容。

现在已经征用了沙发和板凳,结果别人都以为是板油的回复啊。
nritw
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原文由 土老冒豆豆(土老冒豆豆) 发表:
比较好奇:楼主的下划线是怎么弄出来的啊?
还有,您用的是安捷伦液相的什么操作系统,因为我看色谱图的界面和我们1200安捷伦的界面不一样的啊,起码1200操作软件无法做到几个谱图并排放在一起比较。

下划线在发帖的编辑里就有,就是上边那一排,U那个。选中你要加下划线的那部分文字,在点那个按钮就行。点了之后你就发现了,那就是个代码,其实就是把那两个符号中间的部分加下划线。
还有那个谱图比较,我用的是比较老版本的工作站了,你的新版本一定可以。在数据分析里面,你仔细找找。有空我把那个截图发上来,呵呵。
nritw
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原文由 SjS思~~(songjinsi) 发表:
楼主真是谦虚了,这么详细的经验介绍对我这样的门外汉来说简直就是一笔财富啊,最近也在想学习一些仪器的操作,无奈我们实验室的条件。。。。唉!!!

我们这高效液相还行,但是我主要是分离纯化,只有一台常压色谱,连中压制备都没有。老痛苦了,也是同命相连啊
nritw
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请版主将本帖内容加到板凳里,谢谢!


经过了上面三步,又出现了新的问题:
1.第二张图里,主峰前面还有一些杂峰,如果从我收集的部分来讲,是不可能收集到那的。那为什么会有呢?我猜测原因可能是这样的:我收集了大约3ml馏分,然后用吹风机一顿吹,吹成了几乎干了。(为什么不吹干?因为我怕吹跑了,哈哈)后来又把它溶到0.2ml TFA流动相中,这样事实上里面成分和浓度是有变化的,所以可能产生了一些莫名其妙的峰,因为这并不是很关键,峰值也不高,也没有太在意,如果那位战友有别的见解,请指教!
2.明明是在离子对中的一个峰,到TFA里怎么就变成两个了?这个问题可是很头疼的啊,分析其原因,可能有以下两个:第一,在离子对中的单一峰是假象,事实上就不是一种物质,而是至少两种物质,只不过离子对流动相没有分开,而到TFA流动相中就分开了(在这里不得不提一个问题,就是本底,或者说背景,这也是月旭工程师提醒我的。相对TFA,离子对可以抬高本底。也就是说有些物质虽然在离子对没有峰,但它确实存在,而是被离子对的高本底盖过去了,但是到TFA时本底一降,也就表现出来了)。第二,上面说过了,从3ml的离子对流动相浓缩成0.2ml,事实上浓缩了15倍,在这个过程中辛烷磺酸钠的浓度也极大的提高了。而辛烷磺酸钠在210nm是会有一定吸收的,所以可能有一个峰就是辛烷磺酸钠。(到这了可能有网友问我,那有没有用TFA流动相跑一个离子对流动相的样品呢?答案是有。我吸取了20微升离子对流动相,然后在TFA流动相条件下跑,结果除了一开始的杂峰之外是没有别的峰的,如下图。但是这个“空白对照”可靠吗?事实上也不可靠,因为他的浓度比较低,所以我怀疑它作为对照的可靠性。)

考虑了这两个问题之后呢,我又进行了一个实验。把我的样品用TFA流动相也跑一下,看看是几个峰。(到这不知道是不是有人有点对我的样品糊涂了啊,呵呵。我做以上所有的实验都是用的同样样品,假定他是A,然后把A用离子对流动相分离,收集了目标馏分,然后浓缩,再溶于TFA流动相,现在称它为称为a。所以到现在有两个样品两种流动相)就是A用TFA流动相跑,这个在上面有图的。好了,下面让我们看看这张激动人心的图吧(下图所有样都是TFA流动相)。

从上图可以看出,我的样品(即A)在TFA流动相中相应位置是只有一个峰的,a样品是从A样品来的,但是它在相应位置有两个峰的可能性是不大的,据此推测a样品中出现的那个峰有可能是辛烷磺酸钠。另外图中还有两个“空白对照”,虽然他们没峰,但是因为浓度远远不同,所以我觉得不太可靠。这样呢,上面第二个问题有了一个比较可能的答案了,即多出的一个峰是离子对造成的。(还有从上图看出同样样品的重复性很差,不知道为什么。咨询了工程师,说可能是因为强保留物质造成的,所以就反冲了柱子,不知道能不能解决。)
接下来希望能验证一下这个想法,还想做以下实验:
1.用TFA流动相来跑一下相应浓度的辛烷磺酸钠,来个真正的空白对照。
2.用TFA分离A,然后用离子对流动相分析收集的馏分。
各位大侠网友有什么意见建议?请大家不吝赐教!


zxhcnf
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土老冒豆豆
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比较好奇:楼主的下划线是怎么弄出来的啊?
还有,您用的是安捷伦液相的什么操作系统,因为我看色谱图的界面和我们1200安捷伦的界面不一样的啊,起码1200操作软件无法做到几个谱图并排放在一起比较。

下划线在发帖的编辑里就有,就是上边那一排,U那个。选中你要加下划线的那部分文字,在点那个按钮就行。点了之后你就发现了,那就是个代码,其实就是把那两个符号中间的部分加下划线。
还有那个谱图比较,我用的是比较老版本的工作站了,你的新版本一定可以。在数据分析里面,你仔细找找。有空我把那个截图发上来,呵呵。

谢谢指点啊,看来大家要互通有无才更好的运用版面的编辑功能啊。象下划线我就没有用过的。
楼主下次发帖如果觉得有后续的话,不妨先多占据几个沙发和楼层,不然象现在这个样子,被征用楼层的用户很有意见的。
zhw19811005
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