主题：【极限体验&原创大赛参赛作品】一种未知小分子抗生素HPLC分析方法的建立（实验进度更新100109）

原文由 lium601(lium601) 发表:
支持你楼主，只不过，第二种可能我没搞懂，有时间给我讲讲

原文由 土老冒豆豆(土老冒豆豆) 发表:
比较好奇：楼主的下划线是怎么弄出来的啊？
还有，您用的是安捷伦液相的什么操作系统，因为我看色谱图的界面和我们1200安捷伦的界面不一样的啊，起码1200操作软件无法做到几个谱图并排放在一起比较。

原文由 zxhcnf(zxhcnf) 发表:
五.咨询月旭工程师后的思路
    某日在仪器信息网上闲逛，看到了月旭的这个试用活动，于是填写了申请表，想碰碰运气。结果下午就接到了月旭工程师的电话。在了解了我的样品情况和已经做过的试验之后，月旭工程师给出了这样的建议：1，用不同pH的磷酸盐缓冲液作为流动相；2，不同pH的磷酸盐缓冲液中应用离子对试剂（辛烷磺酸钠）；3，换色谱柱，使用月旭公司的AQ柱。整个过程中，月旭工程师的专业知识和良好的态度给我留下深刻印象。第二天，我收到了月旭公司从上海寄过来的色谱柱（真快！），定了药品，准备新的尝试。
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六.同样流动相，两个色谱柱的比较
    所有的药品都到齐了之后，配好流动相，我首先在相同流动相的前提下，对两个色谱柱的分离效果进行了比较。结果表明，月旭AQ柱无论在峰型和保留时间上都远好于另一只色谱柱（这里我们认为色谱图中最显著且主要的峰是我要的有效成分，为什么？以为我做了不同分离程度的样品，结果不变的都是这个峰，嘿嘿）。当然，这并不是在比较两个品牌的好坏，因为一个是普通C18，一个是C18 AQ。但是这个比较证明了AQ柱更适合分析我的样品,也就是说AQ柱更适合强极性的样品。
    下图是某品牌C18柱色谱图

    接下来是Ultimate C18-AQ

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七.确定色谱柱，进行流动相的优化
从上面两柱比较的图可以看到，Ultimate C18-AQ表现良好，特别是在离子对试剂纯在的条件下，分得更开且峰型更好。但是有一个缺点：保留时间太长。所以就要加一些有机溶剂进去，增加洗脱能力，减少保留时间。在月旭工程师的帮助下我选择了乙腈。在上述离子对流动相里添加了10%的乙腈后，保留时间显著缩短，且峰型依然很好。这样最终确定了用于分离的的流动相组成。
下图是加入了乙腈，最终确定的流动相跑出的色谱图

这里有一些小细节。上图中的2，3事实上是同样的流动相（开始我是这么认为的），2是事先把乙腈按比例加到水相里，然后调好pH。3是先调好pH，然后用四元泵将乙腈和水相混合。可以看出3是有明显拖尾的，后来我测了pH才发现3的pH升高了许多。也就是说如果流动相里要加入有机溶剂，特别是在对pH要求较高的时候，不能用四元泵将二者混合，而要事先混合，调好pH,脱气，用泵的一个通道进去。
还有图中的1，这是将2中的pH降低了0.3后得到的色谱图。由图可以看出，。在使用离子对的时候，pH的变化会显得非常敏感。。在这里我将pH优化到2.2，峰的对称性几乎等于1.


原帖为LZ  nritw所发在12楼的帖子，为保持原帖的整体性，应LZ的要求zxhcnf展开乾坤大挪移，已将原帖和12楼的帖子位置对调，请大家见谅，谢谢！

原文由 zyh218(zyh218) 发表:
LZ是一位细心人，很有条理。

物质的分离纯化常常是一件非常辛苦的事情。

从现有的分析来看，经HPLC分离纯化之后的样品仍然呈现两个峰，其原因还有可能是在分段收集、浓缩过程中产生了新的物质，可否用MS对其进行结构确认呢？

原文由 土老冒豆豆(土老冒豆豆) 发表:
比较好奇：楼主的下划线是怎么弄出来的啊？
还有，您用的是安捷伦液相的什么操作系统，因为我看色谱图的界面和我们1200安捷伦的界面不一样的啊，起码1200操作软件无法做到几个谱图并排放在一起比较。