主题：【专题讨论第六期】怎样提高分离度（更新）

【专题讨论第六期】怎样提高分离度


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液相色谱【专题讨论】系列对液相色谱中的诸多专题进行讨论，希望能从各个专题讨论中多听见解，多吸取经验从而规范和完善我们的色谱操作技术，提高对色谱分析的认识，打造我们更年轻更专业化的队伍。同时，邀请色谱版块专家、版主积极参与，研讨和解答版友提出的问题，共同建设我们学习交流的平台。
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本期讨论话题：

怎么样提高分离度？


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——怎样提高分离度？（仅供参考）
1.分离性能是分离能力的重要表现，为判断相邻两组份在色谱柱中的分离情况，可用分离度R作为色谱柱的分离效能指标。
　　定义：
　　相邻两组份色谱峰保留值之差与两个组份色谱峰低宽度总和之半的比值。
　两组分的保留时间的差别取决于固定的热力学性质，差别越大，表示固定相对组分的选择性越高；两峰底宽越窄，表示柱效越高.
分离度可全面反映柱选择和柱效，它是相邻两色谱峰实际分离程度的量度，对于两个峰高相同的对称峰，达到基线分离时，Rs=1.5，此时，两组分的分离程度达99.87%，因此用Rs=1.5作为相邻两峰完全分离的指标.当Rs=1.0时，两峰分离程度达97.72%.如果两峰的高度相差10倍，当Rs=1.0时，低含量组分的分离程度只有88%，这是因为两峰交叉“污染”时，在低含量组分中夹杂的高含量组分与在两峰等高时的相同高含量组分组比所占的比例增大.可直接从色谱图上求出分离度.
对分离的要求可以根据分析目的而定.在一般分析中，使用峰面积定理，Rs=1.0已可满足要求.如用峰高度量，Rs还可小些，但对于制备色谱，为了保证纯度，要求有足够大的Rs.

通过选择合适的固定相达到提高分离度的效果，同时在改变流动相组分比例也能提高分离效果。
2. 离子对试剂是其中的一个手段
3. 不同样品改变不同参数如改变PH值、换柱子、降低进样量、降低流速、柱温等具体问题具体分析
4. 改变洗脱剂的比例等
5. 增加柱温也是一个方面。
6. 看了大家的讨论，谈几点意见吧。
1）从理论上说可以通过降低塔板高度以及增加相对保留时间两个方面来实现。
2）在液相色谱实践中，色谱柱的分离效能虽然可以通过更换高效色谱柱、调整最佳流速等手段来控制，但更多情况下还是保留时间的调整更为来的方便。
3）改变相对保留时间（选择性）的常用手段至少包括：流动相配比、pH值、离子对试剂、柱温度等方面。这些要根据自己关注的难分离组分对的具体情况有选择的实施，所以，必须首先了解它们之间化学性质的差异，然后有针对地选择处理手段。
4）液相色谱分析的目标成分往往比较复杂，常涉及多种成分同时检测，所以在做分析条件的调整时必须同时兼顾所有主要成分色谱行为的变化，其中既包括目标成分，也包括共存的干扰成分。
所以，要想保证所有目标成分在任何样品中都能获得满意的分离度，这是一个十分富有挑战性的课题，即便一个经验十分丰富的色谱工作者同样也不敢轻视。
7. 我们常用的C18柱，一般载碳量高的固定相，分离效果要强一点。有时碰到分离效果不好时，多采用更换色谱柱（不同品牌）的方法，这样避免了再去摸索其他条件而耗费时间，能少改动尽量少该，方法定下了尽量不去动它。
8. 引用原文由 yongw(yongw) 发表:
主要是柱子，别的只是微调
我不大同意你的观点，1）HPLC柱子比较贵的，一般2千数量级，实际应用中固定相的选择总是作为第二选项；2）HPLC柱绝大多数用反相，其中又以C18系列居多，所以通过选择不同固定相来改变分离度的方案多半属于事倍功半。而流动相的改变要灵活得多、简便得多了，其实用效果更是很难用“只是微调”所能概括的了。有时间的话我可以向大家提供一些实际例