操作步骤:
1)取3g新鲜土壤(<2mm)于50mL三角瓶中,加2mL甲苯和10mL蔗糖(10%)溶液,摇匀后,盖紧塞子,于37℃恒温箱中培养7天后离心。
2)取1mL上清液于另一个离心管中,加3mL95%乙醇和1滴氯化钙(1%)溶液,摇匀后离心。
3)倾去上清液,将蔗糖沉淀重新溶于1mL去离子水中,再倾去上清液,反复进行3或4次。
4)最后将沉淀转移至60-70℃水浴上,待干燥后冷却,溶于2mL预先煮沸的去离子水中。
5)取0.5mL于试管中,加5mL酸性试剂(130g甘油、100mL浓盐酸、50mL去离子水和52g硫酸铜•5H2O)和1mL间苯二酚(0.45%)溶液,摇匀,赛紧后在沸水浴上加热1-2min,冷却后在450nm处比色。同时做用0.5mL去离子水代替底物的对照。
土壤果聚糖蔗糖酶活性[mg果糖/(g•7d)]=(C×V×48)dwt式中,C为样品溶液中果糖含量(mg/mL);V为待测溶液的体积(6.5mL);48为稀释倍数;dwt为烘干土壤重量(g)。