主题：【求助】关于HPLC测定多糖分子量的问题

原文由 柏坡(hgycook) 发表:
就算分子量不均一也可能得出这样的色谱峰，多糖凝胶渗透色谱的分离模式决定了它能分离高分子，具有相同化学性质的同系物。可能这3中物质性能比较接近。

原文由 tigertooth(tigertooth) 发表:
如果用别的柱子确实分出3个组分，而TSK的柱子只有一个峰，那么你的分离条件就可能有问题：柱子没分开，原因有多种，比如流动相条件不对，柱子选的不对，柱子和样品有相互作用、吸附等。而且看你的峰，峰型明显不对，GPC的峰肯定不会象普通HPLC峰那么窄，那么尖，就算分散度为1的标样，也不应想你的样品峰这样，最起码分子量低的没分好。看你样品的出峰时间，在根据溶剂峰的出峰时间，按道理讲，柱子的分离效果不应该很差，但后面的峰出的如此之快就不对。
所以分离条件肯定有问题，在如此差的分离下，怎么判断分子量很均一？

原文由 tigertooth(tigertooth) 发表:
如果用别的柱子确实分出3个组分，而TSK的柱子只有一个峰，那么你的分离条件就可能有问题：柱子没分开，原因有多种，比如流动相条件不对，柱子选的不对，柱子和样品有相互作用、吸附等。而且看你的峰，峰型明显不对，GPC的峰肯定不会象普通HPLC峰那么窄，那么尖，就算分散度为1的标样，也不应想你的样品峰这样，最起码分子量低的没分好。看你样品的出峰时间，在根据溶剂峰的出峰时间，按道理讲，柱子的分离效果不应该很差，但后面的峰出的如此之快就不对。
所以分离条件肯定有问题，在如此差的分离下，怎么判断分子量很均一？

原文由 爱杰杰(zhchen1130) 发表:
我们也是做GFC的 ，流动相用的是2.84%的硫酸钠，PH4.0，标准品为一个宽标标准品，数均分子量为3800，我们的样品峰也是一个单峰，楼主用的是宽标还是窄标呢？

原文由 tigertooth(tigertooth) 发表:
柱子不一样，填料不一样，分离效果有可能大不一样。
你的样品峰型有问题，前面象比较标准的GPC的峰，峰上去的很缓，但是从峰尖处下落就有问题了，下落的太快，就是单分散的标样也很难做到，而且一般自己得到的多糖不可能是单分散的，就是做标样的也没有单分散的多糖标样。所以我说峰型有问题，GPC和HPLC不一样的是如果得到的峰是馒头峰，那么一般问题不大，但如果是很尖很细的就要考虑考虑了。
而且你的样品只是多糖么，有没有糖蛋白、蛋白什么的，一般自己提的多糖大部分都有这些东西。

原文由 jiazhi111(jiazhi111) 发表:
峰形好坏不能光说与样品有关吧，还和色谱柱的柱效，填充料，流动相的组成，试剂纯度等等有关，我就碰到过同厂的同时寄过来的两根柱子，一根能做出样，另一根就不行。