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液相色谱（LC）
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主题：【分享】【实战宝典】液相色谱分析多肽药物时仪器条件如何确定？

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小官人
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发表于：2021/03/23 11:13:55 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
问题描述：液相色谱分析多肽药物时，采用什么溶剂作为流动相？如何确定检测波长？

解答：（1）液相色谱法分析化学合成的，结构相似的小分子多肽可采用乙腈和水作为流动相，采用三氟乙酸调节流动相pH值；

（2）三氟乙酸是作为离子对试剂存在的，常用于乙腈流动相中（反相色谱），目的是增加色谱峰的对称性。其作用原理为：乙腈中的三氟乙酸通过与疏水键合相及残留的极性表面以多种模式相互作用，从而改善峰形、克服峰的展宽以及拖尾的问题，同时三氟乙酸与蛋白质及多肽表面上的正电荷以及极性基团相结合以减少极性保留，把蛋白质或多肽带回到疏水的反相表面，另外三氟乙酸又以同样的方式，屏蔽了固定相上残留的极性表面。

（3）除了一些特殊蛋白质或多肽，如含铜离子、铁离子等，一般用波长280nm或者210~220nm检测；前者是蛋白质中特定氨基酸的检测波长，后者是多肽或蛋白质中特有的肽键的主吸收峰波长。

（4）作为药物分析，包括药物的含量分析、活性分析、以及杂质分析等。如果用液相分析多肽药物的杂质时，用正相色谱比其他色谱更方便、更有效、更准确，可优先选用正相色谱。

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