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谢谢了哈!不过即使反冲的话,是不是也不要冲得太久呢?我之前冲过一根柱子,冲过后就不能用了,不懂是不是因为冲得太久的缘故。
是的,反冲虽然不会有什么问题,但冲得太久也没有必要,清洗色谱柱的目的达到了就好,冲太久了对溶剂是一种浪费。您说的冲过后就不能用了,有没有可能是柱子入口端筛板的孔径较大引起的呢?抑或是柱床已经松动峰形本来就很差了,反冲一下就更差呢?
请问zxhcnf版主,冲多长时间合适呢?
由于反向冲洗的清洗效率高,10个柱体积(4.6×250mm的柱体积为4.15ml)应该是够了。我们其中的一个经验数据是,一根XB-C18,5um,4.6×250mm,什么样品都用它做,采用正向使用反向冲洗的维护方式,保持新柱状态(柱效>20000,拖尾因子为1.0~1.10)达7个月,后来做了一次用高氯酸配的流动相pH2.0(这个pH条件对XB-C18没有什么太大损伤,可能是高氯酸的强氧化性对柱子造成了无法修复的伤害),发现柱子的柱效没有太大变化拖尾因子变大了,升至1.13,由于我们是为客户做样,要求色谱柱保持新柱状态,否则无法得出新柱时候的真实状况,因此这根色谱柱对我们已经算是坏柱子了,不能再用。查找原因时,用甲醇、乙腈:水:三氟乙酸=50:50:0.1、乙腈、四氢呋喃、异丙醇、正己烷各冲了60min,每一种溶剂冲洗过后都测一次,没发现有一种溶剂有效。打开柱头,除了填料表面有很薄很薄的一点黄色之外并其它无异常,换掉筛板、挖去柱头前的一点填料,补充填入新填料,通常如果是柱头污染引起的话,这样处理峰形会变好,但色谱柱没有任何改观。由此可见,并非柱头污染引起,说明反向冲洗过程有效的去除了强保留化合物,同时也可以初步判断,该柱的损伤可能是整体性的,是对整个柱床造成的伤害引起的。这种整体性的损伤,流动相造成的可能性很大,因为进样量是很小的,样品上的因素造成的影响有限,而流动相以0.8ml/min流过,这个量很大。初步判定为高氯酸引起的,但这一判断是否正确仍需进一步验证。