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液相色谱（LC）
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主题：【求助】请教：调节流动相问题？

浏览0 回复6 电梯直达
emuchhh
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发表于：2010/06/08 13:49:00 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
各位大侠，本人处理狗空白全血上液相感觉杂质很多主要在9分钟以前，问题是杂质峰拖尾影响后面的主药出峰，引起基线漂移，最郁闷的是主要出峰的位置空白血也有小峰，想调节流动相错开，调了几次但几乎都在一个位置出峰分不开，请问怎么办？
  新买的shim-pack C18柱子，柱温70，流动相先前用乙腈：甲醇：水=70：8：22，现在不用甲醇了，检测波长210nm.
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2010/6/8 14:51:39 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
根据您说的情况看，是否没进行好前处理工作。如果是的话：建议您去除蛋白，细胞，盐等，过SPE柱
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xyhdcm2002
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2010/6/8 15:26:48 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原因为三：一是样品进样量太多而造成过载；二是色谱柱有问题；三是流动相有问题，你可在流动相中加点吹尾剂（三乙胺）。
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emuchhh
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2010/6/8 22:28:47 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 xyhdcm2002(xyhdcm2002) 发表:
原因为三：一是样品进样量太多而造成过载；二是色谱柱有问题；三是流动相有问题，你可在流动相中加点吹尾剂（三乙胺）。


样品处理过程如下：取全血1ml置于10ml,加一定量内标，加入NaOH溶液2ml,涡旋2min，加无水乙醚(重蒸）4ml,涡旋5min，3000转每分钟离心15分钟，取乙醚层40度水浴氮气吹干，加入酸化甲醇溶液（盐酸：甲醇=1：3）200微升重组，加正己烷0.5ml涡旋30秒，3000转每分钟离心10分钟，弃去正己烷层去下层清夜20微升进样。
  大家看处理过程有什么问题？怎么优化？
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emuchhh
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2010/6/9 10:12:46 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
怎么没谁给回答下？
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emuchhh
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2010/6/9 16:53:30 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
主要是检测的主药在血浆跟血细胞里面都溶，大约各占50%吧 不稳定 所以只有测全血。处理过程是看了文献综合后的方法 大部分都是这么处理的，现在在尝试流动相中加入磷酸，三乙胺试下 能不能去杂质，实在不行跑梯度，这个波长基线是不是漂的厉害，固相萃取暂时没仪器做不了啊

固相萃取我有柱子但是没有仪器 ，还能怎么做?
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emuchhh
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2010/6/9 20:48:43 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
分析的主药为多肽类抗生素，现在可以肯定试剂没有干扰，就是血样里的杂质，请大家帮忙！！
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2010/6/9 20:49:11 Last edit by emuchhh
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