要看这一分析方法的具体要求。如果方法中有说明“使用某一色谱柱或与其同样的柱子，”那么，就可以使用别的柱子来替换。但要注意，不能光看一个柱子标为碳18柱，或是其宣传等价于某某柱，就认为该柱适用于所有方法。必须要验证色谱柱的等价性。我们需要考查使用新柱子时，系统适应性是否可以通过验证。如果可以获得系统适用性测试中所要求的保留值，分离度以及其它参数等，就可以使用该柱。推荐使用系统适用性测试样品以及其它的典型样品来进行考查，以保证杂质和降解物在正确的保留时间出峰并给出正确的浓度响应；并且在新柱子上获得的分析结果要等价于在原柱子上的结果。

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plexu

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2010/8/3 11:10:59 265楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 vivian_yuan(vivian_yuan) 发表:
plexu您好我有以下问题想请教
请问：我做一种药的分析，查美国药典规定使用100mm×40mm8μm的色谱柱，流速3mLmin，可现在市场上已不容易找到这种规格的产品。于是我按USP中色谱柱比较的数据库的指引选了一款选择性一致的等价色谱柱，其规格是100mm×46mm3μm的色谱柱。当选用3mLmin的流速时，发现柱压超高，请问我如何对方法进行调整以满足USP的要求？
谢谢

流速调整原则是流动相通过柱子的线速度一致，等价柱的截面积大了，流速也应增加才能保持相同的线速度。新流速计算结果是：（4.6/4.0）²x3.0=4.0ml/min。但3ml/min流速都已导致柱压太高，4.0ml/min明显不行。好在USP还有个允许±50%的流速调整指导原则，这样将流速调至2.0ml/min既符合USP规定，又能使柱压降到可接受的范围，但这种改变不能引起其它不好后果。这个例子中，等度分析中，流速改变会引起塔板数和峰宽的改变，但不会影响峰的选择性。3um粒径色谱柱柱效比8um的高很多，可考虑缩短柱长以补偿或部分补偿流速降低造成的测定时间增加。所以，更佳选择是50 mm × 4.6 mm, 3μm的柱子，2.0ml/min的流速运行，可以在符合USP规定的情况下，又得到更快速的测定分离。

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plexu

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2010/8/3 11:14:15 266楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 samanthalas(samanthalas) 发表:
plexu您好，我有以下问题想请教：
最近我非常的沮丧，按照药典上的色谱条件和方法做某药物的分析，却始终得不到满意的结果。有人建议我对色谱条件，如进样量、流动相pH和温度等，进行微调以得到良好的峰形和分离效果，可按公司规定我不能这样做，怎么办？

如果你心里老有这个思维定势“按规定，我不能......”，然后什么也不敢做，那真是不好办！只有去做了，去试着改变条件看看得到什么结果，你才能发现问题所在。如果改变条件后，仍得不到好结果，就要去找色谱条件以外的原因，如色谱柱、色谱仪器以及样品和制样过程中的是否存在问题？不管通过微调你是否取得了好结果，你也有了向领导汇报问题和解决方案的依据。而且，绝对不能调整药典规定色谱条件的说法通常是不对的。美国药典USP说的是如果改变药典方法需要重新做方法验证，但方法调整或者称微调以符合系统适应性的要求是允许的，是不需要重新做方法验证的。USP列了调整的几条指导原则，如±50%的流速调整，±10 °C的温度调节等等（详见"Chapter 621, Chromatography," United States Pharmacopeia No. 31-NF 26, (2008).）。当然既然是指导原则，这些规定都不是绝对的，如温度调整±10 °C，对有些方法适用，对另外的方法则±5 °C的调整都会有问题，我们应该依据具体情况作出明智的科学判断。

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plexu

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2010/8/3 11:27:40 267楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 zxm-1980(zxm-1980) 发表:
plexu您好！我有以下问题想请教，
请问：新出厂液相色谱柱，保护溶剂一般是什么？怎样进行平衡清洗比较好，一般要平衡多长时间比较好？我是一个新手，问的问题有时可能白痴，请担待。

柱子类型不同，保存溶剂也会不一样吧，具体要看说明书的说明。对于反相柱，一般用甲醇（乙腈）保存，也有用80%左右甲醇浓度的甲醇/水保存的。一般用流动相平衡冲洗10-20个柱体积即可（注意：柱体积不等于空柱管体积，4.6x250mm的色谱柱空柱管体积是4.15ml，而柱体积只有约2.5ml）。

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windeast

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2010/8/3 11:30:41 268楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

请问下Hibar RT250-4这个柱子很特殊么？为什么很多药典中的药物分离都用它做柱子，因为才开始做药，不知道hibar的柱子特点是什么？
不知道plexu能否介绍下。

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plexu

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2010/8/3 11:35:33 269楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 zxm-1980(zxm-1980) 发表:
plexu您好！我有以下问题想请教，
请问：据说液相色谱柱柱压达到一定高度就不能使用了，请问一般达到多高，用甲醇和乙腈是不是不一样？

柱压不是色谱柱不能使用的唯一因素，分离度才是最重要的。柱压只要没高到仪器不能承受的地步，例如超过300bar，就可以一直使用。甲醇的粘度比乙腈高，同样状况的柱子，如果用甲醇做流动相，柱压可能超了，换用乙腈会使柱压下降不少，仪器还能承受。不过尽管柱压还没上升到接近400Bar的限定，如果发现柱压上升速度较快，也需要及早对柱子进行清洗维护，从根本上排除导致柱压上升的源头。

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