主题:【讨论】SDS-PAGE 制胶时胶面弯曲不平会是什么原因

浏览0 回复5 电梯直达
wxhxz
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
最近在跑SDS-PAGE时,老是遇到这种情况,如图示:
分离胶凝固后,把水层倒掉,发现胶面不是以前那种很直的一条水平线,而是弯弯曲曲的,而且分离胶的底部有一小段老是凝不上,从制胶架上取下后底部那段直接流下来,就是液体,所有的储备液都重新配了,APS也是现配的,也混匀了,可是还是老样子,都重复N多次了,也不知道是什么原因,一样的操作,想想以前也没有遇到过这种问题,只犯晕,大家有碰到这种现象啊?
该帖子作者被版主 省部重点实验室3积分, 2经验,加分理由:xiexieO(∩_∩)O谢谢 参与
为您推荐
您可能想找: 电泳仪及配套设备 询底价
专属顾问快速对接
立即提交
dong3626
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
把胶板仔细清洗干净,还有就是密封垫圈,看看是否放置的恰当。

胶配制过程再检查下看有没有问题。

加入浓缩胶之后,在上面加入一些水或者异丙醇,轻轻的磕下胶板在桌面上,这样胶面就会比较平。。
该帖子作者被版主 gl198603122积分, 2经验,加分理由:xiexieO(∩_∩)O谢谢 参与
wxhxz
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
原文由 dong3626(dong3626) 发表:
把胶板仔细清洗干净,还有就是密封垫圈,看看是否放置的恰当。

胶配制过程再检查下看有没有问题。

加入浓缩胶之后,在上面加入一些水或者异丙醇,轻轻的磕下胶板在桌面上,这样胶面就会比较平。。
谢谢您的回复!
我也怀疑过胶板没洗干净,后来胶板用洗洁精洗后,水冲干净还是不行,也没发现漏液的现象,水封之后轻轻晃过的,以前不太在意随便搞搞也都一切OK了,现在谨小慎微,唉自己能想到的都试过了,可是...
tcwenchen
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
底部的缺是凝胶导致的,每次都会有(至少我用bio-rad电泳仪会有,用胶条密封的都会有,六一的由于用的是橡胶环密封,貌似没有)其实page叫凝固时体积变小很容易观察到,楼主制分离胶时用异丙醇或水压,不一会儿就会发现水的液面下降,一般也会认为这是胶凝集的预兆;

至于楼主的上端:个人认为有三种影响原因,但都是应为胶凝的太快了,还来不及压平就凝固了。可能是因为楼主制胶体系里边APS加的太多了(这东西导致胶的凝集),TEMED(助凝剂)太多,或者制胶时温度过高也会加速胶的过早凝集。
该帖子作者被版主 dong36262积分, 2经验,加分理由:解答详细
dong3626
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
楼上回答的有道理。。
凝胶速度过快确实会造成这样的结果
renmeng88711
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
你是用水封还是用的有机溶剂啊  加水时  慢点加就行  加的快的话  容易出现上述情况  另外  还有就是你的胶版好像不太密封  洗干净  先夹好  测漏不漏  20min吧  然后再配胶  配胶时要混匀
该帖子作者被版主 gl198603122积分, 2经验,加分理由:O(∩_∩)O谢谢 交流
猜你喜欢最新推荐热门推荐更多推荐
品牌合作伙伴