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主题：【分享】胶回收资料整理

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发表于：2012/05/05 12:24:11 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
胶回收

 
1.      提高胶回收量的办法：


1)  增加电泳时的上样量。

2)  电泳缓冲液用新鲜配制的。

3)  切胶时尽量只切有条带的胶，减小切胶体积：含目的片断很少的胶就不要要了，不然影响回收率。


4)  把切的两块或多块胶融化后，无论多大的体积都用一个管子，转移到同一个柱子上。


5)  溶胶时所加的溶液可多一点，这样更有利于DNA与膜的结合，不过一般不要多余750ul。


6)  胶回收的关键是通过柱子的溶液的盐浓度、酸碱性（电荷）和疏水性使DNA与柱子结合，因此，若电泳缓冲液的PH偏高，可在溶胶液中加入10ul（PH 5.0，3mol/L的 NaAC）；为了使DNA分子更好的拦截在膜上，可以添加30％异丙醇在加热溶解胶后的液体里。 


7)  加洗脱液之前，将柱子在室温放置几分钟（大约需10分钟），以使乙醇充分挥发。


8)  最后少加些洗脱液，尽量减少回收体积，一般用30-50μl洗脱液洗脱（不能太少，否则无法浸湿膜反而不利于洗脱）；洗脱液滴在膜中央，以充分洗脱结合在膜上的DNA。


9)  可以在加入洗脱液之后，可以在55度水浴5分钟或放在50度水浴10分钟以上再洗脱，或用封口膜密封4度过夜，第二天再离心回收，效果不错。


10)  将离心后的洗脱液加回吸附柱，再次离心。
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