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主题：【分享】民工级琼脂糖电泳制胶TIPs

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发表于：2012/05/05 12:08:11 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
1.称量agarose和buffer
Buffer不要用成H2O，称量相对准确。
这步悄悄地说可以稍微粗糙点，影响不大。


2.融胶，加热到胶产生大量的气泡时，拿出摇匀，继续加热到完全溶解，拿出摇匀，再加热到沸腾。
非常热，小心烫手，另外注意不要加热过度使胶冲出瓶子。因此注意选择起码为胶体积2倍以上的瓶子。保证胶混匀和完全溶解，减少可能因此引起的胶中孔径不均匀影响分离效果。
这步非常重要，如果胶热不匀会跑出非常科幻的条带。


3.倒胶，可用水浴的办法使胶冷却到60度左右，即手可以握住瓶子的温度，沿着制胶板的一侧，缓缓地一次性倒入。梳子最好是预先放好并固定的，注意梳孔的体积能点的下所有的样。用枪头赶掉气泡。
制胶的桌面相对水平。倒胶时尽量减少气泡的产生。EB如果在制胶时加入，在60度左右时加入，使终浓度为0.5ug/ml。不宜过低，染色成像不明显；不宜过高，导致背景太深。摇匀要沿着瓶壁摇动，尽量减少气泡产生的可能性。高浓度胶例如2%以上的EB很难摇匀，而且凝的速度也相对快，强烈建议跑完胶之后再用EB染色。
其实也可以滴加EB进胶槽，用枪头搅匀，跑完了再染有时候效果不是很好。至于60度怎么掌握。。。勉强不烫手就是了



4.室温凝胶30分钟
过程中不要碰到梳子，尽量保持胶的位置不移动。时间不宜过久，导致胶干燥变形；不宜过短，影响胶内部孔径形成。
这个一定要晾够时间，建议盖个一次性手套，不然胶失水过多就没法用了。


5.拔梳子，放入电泳槽。
缓缓地将梳子垂直从梳孔拔出，尽可能使梳子是同时从各个胶孔拔出的。暂时不用的胶最好放入电泳槽电泳液中浸泡。电泳液要浸没胶1mm。
这个不比PAGE胶，一般拔不出问题来。
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