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主题：【分享】Real Time PCR 两种常用的相对定量方法

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发表于：2012/05/05 12:03:15 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
做绝对定量PCR实验，一定而且必须要有标准品，通过稀释标准品制做标准曲线，对待测样品进行定量。因为制做已知拷倍数的标准很困难，而且得到的结果不一定准确。所以目前大部分人都是做相对定量PCR．

　　常用的相对定量方法主要有二种，

1、双标准曲线法　 )

2、delta delta CT 法． 　　


第一种方法中需要标准品，也就只有这一步算是难点了．有以下几种方法，可以根据需要和实验室条件等因素进行选择．

Ａ： 待测基因的pcr扩增产物直接梯度稀释，但是这种方法产生的标准品不易保存。

Ｂ：待测基因的pcr扩增产物重组到质粒载体上，提取质粒，测定浓度或拷贝数，这种方法产生的标准品定量更准确，且容易保存，稳定性好。

Ｃ：靶基因高表达的样品直接进行梯度稀释，这种方法产生的标准品定量从理论上讲能保证与目的基因的扩增效率相等，有一定的优越性。

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