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主题：【分享】确定PCR循环数的一点方法

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发表于：2012/05/05 12:00:44 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
确定循环数的基本原理是: 产物能够保证你进一步分析操作的最小循环数.因为过多的循环
数容易造 成ERRORS和非特异性产物的积累 产物的量不够, 优化的方法有:


1. 增加TEMPLATE

2. 增加循环数

 
如何确定循环数,有一个方法.

做一个PCR体系,40循环,50ul, 分别在20,25,30,35循环时从体系中取5ul,一起跑电泳分析

.从而确定最佳的循环数


另一个会影响PCR特异性的是PCR cycling时在两个温度间变化的速率(ramping rate).当然
是越高 越好.不过咱们大部分条件有限,就那么几台PCR仪,也没有多少挑选的余地
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2012/7/24 14:00:36 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
非常感谢！！
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2012/8/10 21:23:25 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
不错的方法哦，谢谢
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