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主题：【求助】响应信号逐渐变小

浏览0 回复12 电梯直达
anyizhimin
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发表于：2010/09/29 22:54:55 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
同一个标准品反复进样数针，响应高度逐渐变小。尝试数个不同等度，均有如此现象。调整标准品的溶解液（不同比例不同pH值的乙腈），仍有该现象。

仪器：安捷伦1100
色谱柱：Luna HILIC
流动相：乙酸铵缓冲液与乙腈
                               
排除可能的因素：温度变化：否，已经控制柱温恒定
            压力变化：否，压力几乎没有波动
            保留时间：无变化，变异小于0.1分钟
            流动相变化：否，等度条件，溶剂瓶盖严，有机溶剂均为Merk的HPLC纯，缓冲盐也是HPLC纯，水为MQ水，进样间隔仅为5min
            气泡：否，仪器配备脱气泵，在使用前也预脱气过。
            溶解液太弱：否，HILIC更像正相柱，有机溶剂比例越高保留越强。且尝试了从50%乙腈到100%乙腈。
            缓冲液pH值：否，按理论与待测物的pka相差2。
                             
那么还有什么原因会导致如此的结果？
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2010/9/30 7:57:28 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
是否溶液不稳定，容易降解？
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xiaohui9804
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2010/9/30 8:00:39 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
论证下方法吧，标准品浓度你没说，那你就尝试下不同浓度的，做标准曲线系统考察下方法
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anyizhimin
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2010/9/30 8:24:09 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
样品的稳定性没有问题，原来的方法是C18柱的，在进样器放置24h都是稳定的，这个经过方法验证的。我换回原方法就没有这个情况。
而且样品是标准品新配的。
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老多_小多
emoc98311
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2010/9/30 8:34:12 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
是否尝试用别的物质测定来验证仪器的稳定性呢？
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teanyt
teanyt
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2010/9/30 8:49:44 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
可能是标准的问题，建议楼主做一次标准品的核查
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ruby70303
RUBY70303
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2010/9/30 8:51:58 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
紫外灯用多久了？
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Brooks
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2010/9/30 11:00:07 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
如果用C18柱没问题，用HILIC柱就有问题，那就能排除仪器的问题

我以前做过糖，用氨基柱，糖会和氨基柱的键合基团反应。供楼主参考。
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儒雅凤
liwei7893
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2010/10/13 20:31:38 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
Luna HILIC 介绍
交联二醇提供HILIC条件下极性选择性。对极性化合物强大的保留和选择性，同时还增加了样品处理和提高了质谱灵敏度。
Luna HILIC在硅胶表面保留了一层水富集层。这层水层促进极性化合物迁移至固定相上，增加保留。

RC-C18以多键合硅胶为填料，具有优异的稳定性。独特的单官能团化学键合技术可避免形成复合的C18分子层。均匀的涂层确保了固定相具有高选择性和高效率的分离特点。

这两种柱应该是不同的，楼主的样品有否可能与柱子中的固定相有强吸附，因而引起不易洗脱等现象。
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2010/10/14 13:43:24 Last edit by madprodigy
〓猪哥哥〓
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2010/10/13 23:22:31 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 anyizhimin(anyizhimin) 发表:
样品的稳定性没有问题，原来的方法是C18柱的，在进样器放置24h都是稳定的，这个经过方法验证的。我换回原方法就没有这个情况。
而且样品是标准品新配的。


问下原来方法和现在方法差异在哪里？
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〓猪哥哥〓
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2010/10/13 23:23:45 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 ruby70303(RUBY70303) 发表:
紫外灯用多久了？


有这个可能性。但是不知道与原方法的差别在哪里。
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