主题：【第三届原创作品】PH值——影响试验的无形之手（10月）

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小卢

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发表于：2010/10/01 11:36:23 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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PH值——影响试验的无形之手

液相法实验中，流动相是影响试验的因素之一，而ph值又是影响流动相好坏决定因素。因此，可以说ph是影响试验的一双无形之手。今天我就以一个实际例子来说明一下ph在试验中的重要性，来和大家分享一下这双无形之手是如何来影响试验结果的。
正文：
1.试验名称：
头孢噻肟钠含量、有关物质测定（USP标准）
2.色谱条件：
仪器：1200型液相色谱仪
天平：CPA225D型电子天平
色谱柱：C18， 5um×3.9mm×15cm
流速：1.0ml/min
波长：235nm
进样量：10ul
3.流动相：溶液A、溶液B梯度洗脱
溶液A：0.05M缓冲液：甲醇=86:14
溶液B：0.05M缓冲液：甲醇=60:40
0.05M缓冲液：溶解7.1g的无水磷酸氢二钠至1000ml水中，用磷酸调节ph至6.25
4.样品配制：精密称取样品或对照品后用溶液A溶解并稀释规定的倍数
（备注：保证此溶液在24小时内进样，如果能保持在一定的温度下）
5.试验过程：按照质量标准中的要求，进色谱仪，得到如下图谱：
图谱1-1：对照品1

图谱1-2：对照品2

图谱1-3：样品

分析图谱：
只看图谱，我没有发现什么问题，塔板数、分离度、重复性均符合规定。因此我就等样品全部走完后，开始计算结果。但却发现了很大的问题：0天的样品、甚至是对照品，怎么会有那么大的杂质峰（见以上图谱中标示的各主要杂质）呢？原因很简单：样品一定是发生了降解，但问题的关键却是：为什么降解的那么快呢？
于是，我开始寻找原因：
5.1对照品降解，这个可能性很小，但考虑到储存条件下可能吸潮，于是取新的对照品重新配制、进样，结果：杂质峰偏大，没有解决问题；
5.2冷冻盘不制冷，设置的温度为4℃，这是平时一直使用的温度，但由于仪器比较陈旧，进样室的门关不好，因此考虑到可能使样品盘中的温度没有达到设置的温度，于是修理小门，并用温度计测定样品室内温度，符合规定后，进样，结果：杂质峰偏大，没有解决问题；
5.3 配制时间过长，由于每针样品的运行时间为60min，考虑到这段时间内有可能降解，于是采用进样前配制，结果：杂质峰偏大，没有解决问题。
怎么办呢？到底是哪个环节出了问题呢？
再次查找原因，在核查到流动相配制时，我突然发现：缓冲盐用磷酸调节ph至6.25 。根据以往经验，ph值和有机系的比例对流动相的影响，为后者较大，未调节ph值走出的图谱没有异常，因此我在开始也就没有考虑ph值问题。而这里的流动相不仅仅作为洗脱液，还作为了溶剂溶解了样品。因此，ph值就十分的重要了。
既然发现了问题，于是重新配制流动相试验，结果如何呢？我们先来看图谱，如下：
图谱2-1：对照品1

图谱2-2：对照品2

图谱2-3：样品

分析图谱：
和原来的图谱比较，相同位置的杂质峰面积明显变小，甚至没有了，计算含量、有关物质，都在合格范围内，可以说问题完全得到了解决。
6.小结：
从峰形、保留时间来看，两次试验的图谱没有什么区别。那么，pH值在这里为什么起了那么大作用，使样品快速降解了呢？于是，我重新测定了旧流动相的ph值，结果为9.1，呈碱性。而头孢噻肟钠是由头孢噻肟酸经过结钠得到，其在碱性溶液中是易降解的，因此质量标准中要求用磷酸调节ph至6.25，这样的话就找到原因了。
其实这个问题看起来很简单，但却是我们平时不怎么注意的，尤其是我们试验做的多了、经验丰富了，反而做起试验来就不怎么看质量标准了。希望通过我的这次试验，也使大家能找到自己在试验中的其他问题，让比如ph值之类影响实验的无形之手暴露在阳光之下。

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