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β—胡萝卜素是一种抗氧化剂，具有解毒作用，是维护人体健康不可缺少的营养素，在抗癌、预防心血管疾病、白内障及抗氧化上有显著的功能，并进而防止老化和衰老引起的多种退化性疾病。β—胡萝卜素也可作为一种食用油溶性色素，其本身的颜色因浓度的差异，可涵盖由红色至黄色的所有色系。

1、检测仪器

1) 单光束紫外可见分光光度计，SP-2000UV，上海光谱仪器有限公司

2) 高效液相色谱仪，L-2000，HITACH

①　L-2130输液泵

②　L-2200自动进样器

③　L-2300柱温箱

④　L-2400紫外可见检测器

⑤　EZChrom Elite系统工作站

2、色谱条件

色谱柱：Hitachi LaChrom C18(5μm) 4.6mmI.D.x250mmL

柱温：38℃

检测波长：450nm

流速：1mL/min

进样量：20μL

流动相A：甲醇：乙腈：正己烷：二氯甲烷（15：20：20：20，V/V）

流动相B：甲醇：乙腈（90：10，V/V）

3、溶液配制

标准储备液：准确称取β-胡萝卜素标准品适量于50mL容量瓶中，用三氯甲烷溶解后定容,现用现配，临用前标定其准确浓度。

标准中间液：用移液管吸取1mL标准储备液于25mL容量瓶中，用流动相定容后待用。

标准使用液：分别吸取0.5,1,2,3,5mL标准中间液于5个25mL容量瓶中，用流动相定容。

4、 β-胡萝卜素标准储备液的标定

取β-胡萝卜素标准储备液10.0μl，加正己烷3mL，混匀，以正己烷为空白测吸光度值，波长450nm，平行测定三次，取均值，按下式计算溶液浓度：

标准溶液浓度 =	A×3.01
	E×0.01

式中:

X— 胡萝卜素标准溶液浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL)；

A— 吸光度值；

E—β-胡萝卜素在正己烷溶液中，入射光波长450nm，比色杯厚度1cm,溶液浓度为1mg/L的吸光系数，为0.2683；

3.01	—	测定过程中稀释倍数的换算系数。
0.01

5、样品前处理

1）皂化-萃取

1) 样品的皂化：称取样品0.1 g（精确到0.0001克）于250mL皂化瓶中，加无水乙醇30mL，加50%氢氧化钾溶液10mL，边加边摇至上述溶液混匀，将转子放入皂化瓶移至磁力加热搅拌电热套上，使其处于沸腾回流30min后，用乙醇冲洗冷凝管后取下，冷却至约40℃。

2) 样品的提取：转移皂化液于500mL分液漏斗中，用约50mL蒸馏水分3次冲洗皂化瓶，将洗液及残渣并入分液漏斗，用100mL石油醚分3次冲洗皂化瓶，石油醚及残渣并入分液漏斗，用分液漏斗瓶塞密封转移至振荡器上，振摇分液漏斗，280r/min，震摇两次，每次3min，其间要放气，取下分液漏斗，用蒸馏水冲洗瓶塞，用约50mL/次蒸馏水洗分液漏斗中的石油醚层，静置分层，弃去水层，共3次最后要将水层去净。

3) 样品浓缩：将无水硫酸钠放入用棉塞堵好漏斗中，置于150mL平底烧瓶上，收集醚液，用约20mL分2～3次石油醚冲洗分液漏斗，洗液并入烧瓶中，再用约10mL石油醚分三次冲洗无水硫酸钠，洗液并入烧瓶中，水浴 40℃真空抽干，取下加入20mL流动相，滤液过0.45μm滤膜后待用。

2）溶剂萃取

称取0.2g试样于50mL带塞离心管中，用石油醚+丙酮(80+20，V/V)混合液振摇提取，吸取上层黄色液体并转人蒸发器中，重复提取直至提取液无色，合并提取液，于旋转蒸发器上蒸发至干(水浴温度为40℃).

6、实验结果

（1）标准曲线

表1 β-胡萝卜素标准溶液浓度及峰面积

序号	标准浓度（mgmL）	保留时间（min）	峰面积
1	0.33	4.120	640820
2	0.82	4.120	1038747
3	1.64	4.127	1716245
4	3.27	4.113	4345105
5	8.19	4.120	10254220
6	16.37	4.130	17815064

（2）色谱图及含量

（一）样品处理采用皂化-萃取方法，流动相采用A组

（二）样品处理采用皂化-萃取方法，流动相采用B组

（三）样品处理采用溶剂萃取方法，流动相采用B组

表2 不同条件下样品检测结果

条件	水果精华片A(mg/100g)	水果精华片B(mg/100g)
（一）	110	97.7
（二）	37.3	31.3
（三）	未检出	未检出
实际添加量	100	100

7、结论

1.β-胡萝卜素属于脂溶性物质，化学性质不稳定，遇氧、热和光时呈不稳定，因此为了提高其稳定性及改善其溶解性，经常采用糊精、明胶等物质进行包埋处理，因此样品直接采用溶剂提取，不能将其中含有的β-胡萝卜素提取出来；通过皂化后再萃取则可以得到满意的结果；

2.流动相A系统分析时间短，且对β-胡萝卜素有很好的保留，节省流动相；而流动相B系统分析时间较长，同时浪费大量的有机试剂；

3.采用皂化-萃取及流动相A系统方法可以对同类产品：蔬菜精华片以及胶囊中的β-胡萝卜素含量进行定量分析，测量结果与实际添加量均比较吻合。

附件：

水果精华咀嚼片中β-投稿.doc

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2010/11/8 11:12:47 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

看了楼主的文章有几个问题想咨询下，胡萝卜素是可以很好溶解在氯仿或者正己烷？所以流动相有二氯甲烷，不知为什么要比较流动相B？而且时间延迟了好多，如果说减少一种溶剂还有可能有比较好的分离效果。
另外，在做标线，选择的点个数不一样，所以R也有差别，不有可比性。需要增加数据方能说明问题。

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2010/11/16 21:37:02 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

胡萝卜素在氯仿或者正己烷易溶。

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fengmo4668

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2011/5/4 17:07:41 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 小不董(doxw0323) 发表:
看了楼主的文章有几个问题想咨询下，胡萝卜素是可以很好溶解在氯仿或者正己烷？所以流动相有二氯甲烷，不知为什么要比较流动相B？而且时间延迟了好多，如果说减少一种溶剂还有可能有比较好的分离效果。
另外，在做标线，选择的点个数不一样，所以R也有差别，不有可比性。需要增加数据方能说明问题。

流动相B的方法好像是国标中的方法。
（参见GB/T 5009.83-2003）

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